汤晓琳 杨丹 吕鑫 沈薇

(沈阳医学院 1机能实验中心，辽宁 沈阳 110034；2药理教研室；3 2018届临床医学专业；4病理生理教研室)

正常上皮细胞与细胞外基质(ECM)脱离黏附后，细胞与基质相互作用消失，发生失巢凋亡(anoikis)。肿瘤对失巢凋亡的抵抗能力在肿瘤转移中发挥重要作用。胃癌是全球常见的恶性肿瘤，预后较差，其5年生存率仅为20%～30%〔1〕，胃癌转移是导致死亡的最主要原因。研究表明，分泌型卷曲相关蛋白(SFRP)1在胃癌中呈低表达，且与淋巴结转移及患者不良预后相关〔2〕。有报道SFRP1甲基化致基因沉默促进胃癌的形成和发展〔3〕，但关于SFRP1对细胞失巢凋亡的影响及其机制尚少报道。本课题组在前期研究中发现胃黏膜上皮细胞(GES)-1为失巢凋亡敏感细胞〔4〕，本研究应用RNA干扰沉默GES-1中SFRP1表达，观察其对GES-1细胞失巢凋亡敏感性的影响，并探讨其相关分子机制。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂 人GES-1(武汉普诺赛公司)。RPMI1640培养基(美国Corning公司)；胎牛血清(美国Gemini公司)；胰蛋白酶-乙二胺四乙酸(EDTA)(天津灏洋生物有限公司)；SFRP1基因siRNA(上海吉玛基因公司)；脂质体Lipofectamine 2000(美国Invitrogen公司)；RNA提取试剂盒(美国Axygen公司)；逆转录试剂盒、Q-PCR试剂盒(美国Promega公司)；多聚α-羟乙基甲基丙烯酸酯(Poly-HEMA，美国Sigma公司)；凋亡检测试剂盒(日本同仁化学研究所)；CytoSelectTM24-Well Anoikis Assay(美国Cell Biolabs公司)。兔多克隆抗体SFRP1(美国Abcam公司)；鼠单克隆抗体β-catenin 抗体、β-actin抗体(美国Santa Cruz公司)；辣根过氧化物酶(HRP)标记山羊抗鼠和山羊抗兔IgG，增强化学发光(ECL)试剂盒(美国Proteintech公司)；红色荧光素(RRX)标记山羊抗兔IgG(中国康为世纪公司)；4′6-二脒基-乙-苯基吲哚(DAPI)染液、十二烷基硫酸钠(SDS)-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)配制试剂盒(上海碧云天公司)。……