侯明飞 范 涛

（山东省宁阳县行政审批服务局，山东宁阳 271400）

乳房炎是一种危害奶牛产业的重要疾病，不仅影响奶牛的产奶量，而且降低牛奶的品质，影响人体健康，延长奶牛产后发情和妊娠时间。奶牛乳房炎的发生较复杂，化学性刺激、物理性刺激，饲养管理不善等各种因素均可诱发，乳房感染致病性或条件致病性微生物，进而发生乳房炎。引起奶牛乳房炎的病原微生物很多，有细菌、真菌、病毒、支原体等，但主要由细菌引起。据有关报道，奶牛乳房炎中以金黄葡萄球菌、大肠杆菌、无乳链球菌、停乳链球菌和乳房链球菌这五种细菌最为常见。

目前对奶牛乳房炎诊断和检测有乳汁细胞学检查法、乳汁pH检查法和乳汁导电性检查法等多种方法，但是这些方法存在繁琐、耗时、费力等缺点[1]。而PCR技术具有有效、快速、简便的优点，所以此次试验采用PCR技术检测和鉴定这五种奶牛乳房炎主要病原菌。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 样品来源

来自泰安地区奶牛场，采集牛奶约5～10 ml放入灭菌瓶中，作好标记，冰浴中送回实验室，4℃保存，共47份。

1.1.2 引物

根据NCBI和相关文献资料设计引物，由生工生物工程（上海）股份有限公司合成引物。详细见表1。

表1 PCR反应中的引物

1.1.3 试验试剂

2*power Taq PCR Mastermix购自BIOTEKE CORPORATION公司，DL2000 DNA Marker，药敏片：庆大霉素、头孢唑啉、红霉素、环丙沙星、卡那霉素、林可霉素、大观霉素，营养琼脂，兔血，其他。

1.1.4 主要仪器设备

PCR仪购自Gene Amp公司，电泳仪，紫外凝胶成像仪，DRP-9082型电热恒温培养箱、DKS12型电热恒温水浴锅均购自上海森信实验仪器有限公司，紫外分析仪UV-型购自北京宾达英创科技有限公司，台式高速离心机Neofuge13购自上海力申科学仪器有限公司，胶回收试剂盒购自北京天恩泽基因科技有限公司。……