解瑞辉，郭社民，申利平

（1.河南省濮阳市食品药品检验检测中心，河南 濮阳 457000； 2.河南省濮阳市食品监督所，河南 濮阳 457000）

乙酰乌头碱片曾用名3-乙酰乌头碱片、新乌宁通片，适用于各类止痛[1-3]，主要成分为 20- 乙基 -l，6，1 6-三甲基氧基 -4-（甲氧基甲基）乌头烷 -3，8，13，14，15-五醇-3，8-二醋酸醋-14-苯甲酸酯，系由毛蓖科乌头属植物伏毛铁棒锤中分离提取有效成分加工制成的片剂。乙酰乌头碱片现行标准采用紫外可见分光光度法（UV）测定其含量[4]。国内有2家企业生产乙酰乌头碱片，规格均为0.3 mg，重量差异不能真正反映药品的均匀性。本研究中采用高效液相色谱（HPLC）法测定乙酰乌头碱片的含量，同时增加含量均匀度的测定。现报道如下。

1 仪器与试药

Waters2695型高效液相色谱仪（美国沃特世公司），包括Empower3化学工作站和2489UV／vis检测器；Secomam UVIKON xL型双光束扫描紫外／可见分光光度计（法国赛克曼公司）；Mettler Toledo XS205EU型电子天平（瑞士梅特勒-托利多公司）。乙酰乌头碱（阿拉丁工业公司，美国 CAS NO.77181-26-1，LOT.E1508001，含量为98%）；乙酰乌头碱片（市售，北京某厂家，批号为20180403；陕西某厂家，批号分别为170801，171101；规格均为0.3 mg）；甲醇、乙腈均为色谱纯，乙醇、无水三氯甲烷均为分析纯，碳酸氢铵（优级纯），水为纯化水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：WatersBridgeC18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：0.1%碳酸氢铵溶液 -乙腈 （60 ∶40，V∶V）；流速：1.0 mL ／min；检测波长：232 nm；柱温：室温；进样量：20 μL。外标法峰面积定量。

2.2 溶液制备

称取乙酰乌头碱15.32 mg，精密称定，置50 mL容量瓶，加无水氯仿5 mL，超声溶解，用70%乙醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液；精密量取贮备液5 mL，置50 mL容量瓶，加70%乙醇至刻度，摇匀，作为对照品溶液。按处方制备工艺制得不含乙酰乌头碱的阴性对照品溶液。取本品20片，精密称定，研细，称取适量（约相当于乙酰乌头碱1.5 mg），置50 mL容量瓶，加无水氯仿5 mL超声溶解，加70%乙醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

2.3 方法学考察

干扰试验：分别精密量取阴性对照品溶液、对照溶液、供试品溶液各20 μL，进样测定，记录色谱图。结果其他成分对乙酰乌头碱的分析无干扰，详见图1。

图1 高效液相色谱图

线性关系考察：精密量取2.2项下对照品贮备液2，3，5，10，15，20 mL，分别置 100 mL 容量瓶中，加 70%乙醇稀释至刻度，摇匀，分别精密量取溶液各20 μL，进样测定，记录色谱图。以进样质量浓度（X，μg／mL）为横坐标、峰面积（Y）为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程Y＝4 030.2X-1 520.4，r＝0.999 8（n＝6）。结果乙酰乌头碱进样质量浓度在 6.0 ～60.2 μg／mL 范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验：取2.2项下同一对照品溶液，按拟订色谱条件连续进样测定6次。结果乙酰乌头碱峰面积的RSD为0.28%（n＝6），表明仪器精密度良好。

稳定性试验：取2.2项下同一批（批号为170801）供试品溶液，分别于 0，2，4，6，8，10，12 h 时分别精密量取20 μL注入色谱仪测定，记录色谱图。结果乙酰乌头碱峰面积的RSD为0.79%（n＝6），表明供试品溶液在12 h内基本稳定。

重复性试验：取同一批（批号为170801）供试品，按2.2项下方法制备供试品溶液，平行制备6份，按拟订色谱条件进样测定。结果的RSD为0.93%（n＝6），表明方法重复性良好。

加样回收试验：称取已知含量的供试品细粉（批号为 170801，含量为每片 0.2973mg），精密称定，共 9 份，分别置50 mL容量瓶中，分别精密加入对照品贮备液4，5，6 mL，按2.2项下方法制备供试品溶液，分别精密吸取20 μL注入液相色谱仪，依法进样测定，计算回收率。结果见表1。

表1 乙酰乌头碱加样回收试验结果（n＝9）

2.4 样品含量及含量均匀度测定

含量测定：取3批供试品，按2.2项下方法制备供试品溶液，每批平行3份，照拟订色谱条件测定，按外标法以峰面积计算含量。结果见表2。

表2 供试品含量及含量均匀度测定结果

含量均匀度测定：分别取3批供试品各10片，研细，分别置10 mL容量瓶中，加无水氯仿1 mL超声溶解，加70%乙醇稀释至刻度，摇匀。照拟订色谱条件测定，按外标法以峰面积计算每片的标示量，按2015年版《中国药典（四部）》通则 0941[5]含量均匀度检查法，计算A＋2.2S。结果见表 2。

3 讨论

曾试用不同比例甲醇-水、甲醇-碳酸氢铵溶液、甲醇-磷酸二氢钾溶液等作为流动相进行试验，但均不理想。参考文献[6]，以碳酸氢铵溶液-乙腈为流动相，峰形对称性符合要求，乙酰乌头碱峰的理论板数高，与三氯甲烷的峰分离度较好。

国内2家药品生产企业生产乙酰乌头碱片，规格均为 0.3 mg。按《中国药典（四部）》要求片剂、硬胶囊剂、颗粒剂或散剂等每一单剂标示量均小于25 mg，建议检查含量均匀度[5]，增强制剂学对药物的质量控制。

乙酰乌头碱易溶于三氯甲烷，几乎不溶于乙醇，不溶于水。故用无水三氯甲烷溶解，试验过程中溶剂中的三氯甲烷对乙酰乌头碱的分离有影响；曾尝试挥干三氯甲烷但重复性较差，试验过程应选择适宜的色谱柱。