徐苏丽，邢丽花，任 霞，史素影，刘玉梅，高广印，吕 胜，俞年军

(1. 黄山职业技术学院医学系，安徽 黄山 245000；2. 安徽中医药大学药学院，安徽 合肥 230012；3. 安徽广印堂中药股份有限公司，安徽 亳州 236800；4. 安徽省旌德县人民医院，安徽 旌德 242600)

1 材料

1.1 药材 徽州地区菊花样品采自安徽省歙县、休宁县、旌德县、绩溪县，见表1，经安徽中医药大学俞年军教授鉴定为菊科植物菊(ChrysanthemummorifoliuRamat.)的干燥头状花序，其中包括贡菊、七月菊、金丝皇菊、黄菊。

1.2 仪器 Agilent 1260 Infinity Ⅱ 液相色谱仪(包括G7111A四元泵、G7129A自动进样器、G7114A紫外检测器)：美国Agilent公司；HH-4数显恒温水浴锅：江苏省金坛市晶玻实验仪器厂；AS系列超声清洗机：天津奥特赛恩斯仪器有限公司；竑力HL-200A型高速多功能打粉机：上海赛耐机械有限公司。

1.3 试剂 绿原酸(批号 11075-200413，纯度≥98%)、木犀草苷(批号 111720-201609，纯度>94.9%)、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸(批号 111782-201706，纯度>97.3%)：中国食品药品检定研究院。乙腈(色谱纯)：瑞典Oceanpak；纯化水：自制；磷酸(色谱纯)：天津永大化学试剂有限公司；其余所用试剂均为分析纯。

2 方法和结果

2.1 色谱条件 Topsil HPLC C18色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流动相为0.1%磷酸水溶液(A)-乙腈(B)，梯度洗脱(0～11 min，10%～12% B；11～13 min，12%～14% B；13～45 min，14%～18% B；45～46 min，18%～21% B；46～55 min，21%～24% B；55～80 min，24%～26% B；80～85 min，26%～45% B；85～90 min，45%～55% B；90～105 min，55%～10% B)，柱温30 ℃，流速1.0 mL/min，检测波长325 nm，进样量10 μL。

2.2 样品制备

2.2.1 对照品溶液制备 分别精密称取绿原酸1.26 mg、木犀草苷1.23 mg、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸5.43 mg，置于50 mL容量瓶中，用75%甲醇定容，配制成25.2 μg/mL绿原酸、24.6 μg/mL木犀草苷、108.6 μg/mL 3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸混合对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液制备 称取菊花样品粉末(过2号筛)1.0 g，置于100 mL圆底烧瓶中，加入75%甲醇30 mL，水浴回流提取1.5 h，平行3次。合并滤液，浓缩，定容于50 mL容量瓶内，用0.45 μm微孔滤膜过滤，取续滤液。

2.3 方法学考察

2.3.1 精密度试验 取……