孙 全，吴文辉，徐 冲，刘 霞，杨 敏，冷 静

(重庆市中医院 药剂科，重庆 400021)

乌梅具有敛肺止咳、涩肠止泻、生津止渴、安蛔止痛的功效，常用于肺虚久咳、久泻久痢、虚热消渴、蛔厥呕吐、腹痛、虚热消渴等症。乌梅有乌梅肉、醋乌梅、乌梅炭等炮制品[1]。醋制法为乌梅最早的炮制方法，首载于汉代《金匮玉函经》，现代理论认为，醋制乌梅有增强收敛固涩作用，对肺虚久咳、兼有胃酸不足者尤为适宜。乌梅炒炭长于收敛止血，可以使血液蛋白凝固，血管收缩[2]。也有观点认为乌梅炒炭的作用来源于炭的吸附以及有机酸。乌梅的主要物质基础为有机酸类，枸橼酸在乌梅中的含量较高。药理研究证明，乌梅水煎液具有较强和较广的抗菌[3-6]、抗氧化[7-8]、镇静催眠[9]、对小鼠溃疡性结肠炎有一定的治疗作用[10]。乌梅是否去核使用存在争议，有人认为乌梅去核耗时耗力，不应去核。有人认为乌梅核有机酸含量较低，所占比重大，应该去核使用。乌梅不同炮制品以及不同部位中枸橼酸的含量测定还未见文献报道，本文测定了乌梅不同炮制品及不同部位中枸橼酸的含量，该方法简便、准确，为乌梅的质量控制及临床应用提供了依据。

1 实验部分

1.1 仪器与试药

1260型高效液相色谱仪(安捷伦科技有限公司)，XA205DU型十万分之一天平(梅特勒-托利多国际贸易有限公司)，乌梅(四川新荷花中药饮片股份有限公司，批号：D1506073)，枸橼酸对照品(中国食品药品检定研究院，批号：111679-200401)，AS10200AT型超声波清洗器(天津奥特赛恩斯仪器有限公司)。

1.2 方法与结果

1.2.1 乌梅不同炮制品的制备 取乌梅药材，分离果肉与果核部分，得到乌梅肉与乌梅核样品。取乌梅药材100 g，加入米醋200 mL，浸泡12 h，干燥。分离果肉与果核部分，得到醋乌梅、醋乌梅肉、醋乌梅核样品。取乌梅肉，预热炒药锅至100 ℃时投入乌梅肉100 g，并待锅温升至235 ℃时开始计时，控制此温度不变，共炒制8 min，迅速出锅，熄灭火星，摊凉即得乌梅炭[11]。

1.2.2 溶液的制备 称取乌梅不同炮制品及不同部位样品1 g，加入50 mL的30%的甲醇，称定重量，超声(40 kHz，150 W)提取1 h，用30%的甲醇补足减失的重量。提取液用0.45 μm的微孔滤膜过滤，作为供试品溶液。精密称取枸橼酸159.75 mg置于10 mL的容量瓶中，加入30%的甲醇稀释至刻度，得到浓度为15.975 mg/mL的对照品溶液。

1.2.3 色谱条件 色谱柱：Phenomenex C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)色谱柱，检测波长：215 nm，流速：0.6 mL/min，柱温：25 ℃，流动相：甲醇-0.2%磷酸梯度洗脱，梯度洗脱程序见表1。

表1 流动相梯度洗脱程序 (%)

1.2.4 系统适应性试验 分别精密吸取“1.2.2”项下对照品溶液以及供试品溶液，各20 μL，进样，按照“1.2.3”项下色谱条件分析，色谱见图1。在供试品溶液的色谱中，有与混合对照品溶液中枸橼酸保留时间相同的色谱峰，枸橼酸的出峰时间为10.560 min，目标峰与杂质分离较好，峰形尖锐，目标峰的理论塔板数不低于7 000，分离度大于1.5，说明系统适应性良好。

图1 对照品(A)，乌梅提取物(B)的HPLC 色谱(1枸橼酸)

1.2.5 线性关系考察 精密吸取枸橼酸对照品溶液0.2、0.6、1.0、1.5、2 mL置5 mL容量瓶中，加30%甲醇稀释至刻度，即得系列对照品溶液，按照“1.2.3”项下色谱条件进行分析，以峰面积为纵坐标，以枸橼酸对照品溶液的浓度(mg·mL-1)为横坐标，绘制标准曲线，枸橼酸的线性回归方程、相关系数、浓度线性范围见表2。

表2 枸橼酸的线性回归方程、相关系数、浓度线性范围

1.2.6 加样回收率 称取已知含量的乌梅粉末9份，每份约0.1 g，分别精密加入乌梅粉末中枸橼酸含量约80%、100%和120%的单体对照品溶液，按照“1.2.2”项下的方法制备供试品溶液，按“1.2.3”项下色谱条件测定，计算枸橼酸的平均回收率，结果见表3。

表3 枸橼酸的回收率试验结果 (mg, n=9)

1.2.7 稳定性、精密度及重复性实验 取乌梅供试品溶液，室温下放置0、4、8、12、24 h，按“1.2.3”项下色谱条件分别进样测定峰面积，枸橼酸的RSD为0.56 %，稳定性实验符合测定要求。取枸橼酸对照品溶液，按“1.2.3”项下方法连续进样6次，测定峰面积，枸橼酸的RSD为0.47%，精密度实验符合测定要求。按供试品配制方法平行配制6份，按“1.2.3”项下方法进样分析，测定峰面积，枸橼酸的RSD为0.75%。重复性实验符合测定要求。

1.2.8 含量测定 取乌梅不同炮制品及不同部位样品，按照“1.2.2”项下方法制备供试品溶液，按照“1.2.3”项下方法分析，测定不同炮制品及不同部位中枸橼酸的含量。枸橼酸的含量见表4。

表4 乌梅不同炮制品及不同部位中枸橼酸的含量 (n=3)

2 讨论

乌梅不同炮制品及不同部位中有机酸的含量差异较大，乌梅核中枸橼酸的含量约为乌梅肉枸橼酸含量的1/4。乌梅经过醋制以后，枸橼酸的含量有明显的降低，可能是因为在醋泡的过程中导致乌梅有机酸的损失。乌梅炭里面没有检测出枸橼酸，说明乌梅炒炭对有机酸的含量影响较大，乌梅是否去核使用存在争议，乌梅不同炮制品及不同部位中枸橼酸的含量测定可为乌梅的质量控制及临床应用提供依据。