鼻安纳米乳凝胶制备及其主要成分含量测定

2019-07-16王适，何群

亚太传统医药 2019年6期

王适，何群

(1.湖南中医药大学第二附属医院，湖南长沙 410005；2.湖南中医药大学，湖南长沙 410208)

鼻安纳米乳即型凝胶以薄荷脑、丁香酚为主要药效成分，具有清凉消炎的功效，可用于治疗鼻炎。鼻炎是五官科常见病、多发病。目前，治疗鼻炎的鼻腔制剂主要有滴鼻剂、喷雾剂、气雾剂等[1]。液体剂型滴入鼻腔后能够透过鼻黏膜吸收入血运转至全身，生物利用度较低，靶向性较差，导致疗效降低。半固体剂型涂展性较差，分散不均匀，容易堵塞鼻腔通道。固体剂型(干粉剂)使患者打喷嚏、鼻溢和鼻塞的局部副作用明显。

即型凝胶兼备溶液剂与凝胶剂的优点，使用方便，并具有良好的组织相容性和生物黏附性，与用药部位，特别是黏膜组织亲和力强，滞留时间长，控制释药性能良好。鼻用即型凝胶具有使用方便、给药剂量准确、与鼻腔黏膜粘附力强的优点。

本文对鼻安纳米乳型即型凝胶制剂的制备方法进行研究，并对其主要成分进行含量测定，为其工业化生产提供参考依据。

1 试药与仪器

1.1 药材与试剂

薄荷脑(纯度99%，吉安市中香天然植物有限公司)；丁香酚(纯度99%，吉安市中香天然植物有限公司)；肉豆蔻酸异丙酯(国药集团化学试剂有限公司)；1,2-丙二醇(天津市恒兴化学试剂制造有限公司)；薄荷脑对照品(中国食品药品检定研究院，批号120508-201706)；丁香酚对照品(中国食品药品检定研究院，批号110831-201603)；聚氧乙烯氢化蓖麻油(BASF公司)；泊洛沙姆407(BASF公司)；水为蒸馏水，水杨酸甲酯、硫酸钠、无水乙醇均为分析纯。

1.2 仪器

AR124CN型电子分析天平(奥豪斯仪器上海有限公司)；SP-6890型气相色谱仪(山东鲁南瑞虹仪器有限公司)。

2 方法与结果

2.1 鼻安纳米乳处方优化

2.1.1 油相的确定肉豆蔻酸异丙酯(IPM)为纳米乳常用油相，因其界面张力低、分散性好、黏滞度较小，因此较易制成纳米乳。据报道[2]，采用IPM制成的纳米乳稳定性好，易于分布到活性表皮层，增加药物的渗透性，可以作为纳米乳的基础油相[3]。本实验将薄荷脑、丁香酚溶于IPM为混合油相。

2.1.2 乳化剂与助乳化剂的确定[4-6]纳米乳常用的乳化剂有聚氧乙烯氢化蓖麻油(RH-40)、蓖麻油聚氧乙烯(EL-40)、吐温-80(Tween 80)等，常用的助乳化剂有无水乙醇、1,2-丙二醇、1,3-丁二醇等。由于前期试验中选用RH-40和1,2-丙二醇取得较好的乳化效果，制备的纳米乳呈淡蓝色、澄清透明，光照后有丁达尔现象，离心(3 000 r·min-1，30 min)后稳定，故选用RH-40作为乳化剂，选用1,2-丙二醇作为助乳化剂。

2.1.3 伪三元相优化乳化剂与助乳化剂的质量比(Km值)[7]以RH-40∶1,2-丙二醇的比例分别为2∶1、3∶1、4∶1时绘制伪三元相图，筛选出最佳Km，结果见图1。可见Km值为3∶1时，纳米乳区域最大，故选择乳化剂与助乳化剂的比例为3∶1。

图1 不同Km值伪三元相图

2.1.4 正交设计试验法优化纳米乳处方组成影响纳米乳制备工艺条件及成品成型性、稳定性较大的3个因素油相、乳化剂及助乳化剂的用量,每个因素取3个水平(3种用量)。见表1。

L9(34)正交设计试验安排及等级一致性检验结果见表2。

表1 因素水平设计 (g)

表2 鼻安纳米乳处方筛选正交设计安排及结果分析

观察纳米乳外观色泽性状、离心稳定性(3 000 rpm，30 min)，于25 ℃条件下快速搅拌乳化考察成乳时间，观察澄明度，并对以上4项指标系凭感官感觉打分，由20人参加评价，由好至差按等级排列，排成1～9个等级，20人平均分见表2。

2.1.5 鼻安纳米乳制备称取处方量丁香酚、薄荷脑置于烧杯中，加入IPM充分溶解成7.5 g的混合油相，在搅拌状态下加入RH-40 18 g、1,2-丙二醇6 g，25 ℃恒温磁力搅拌状态中缓慢滴入常温蒸馏水。开始时体系黏度较小，随着蒸馏水量的增加，体系变黏稠，继续滴加并不断搅拌，至体系澄明，即得鼻安纳米乳。

2.2 鼻安纳米乳凝胶制备

2.2.1 即型凝胶剂基质筛选[8-9]由于该制剂为鼻腔给药，故应选用能与鼻液混合分散良好的水溶性基质。泊洛沙姆(Poloxamer)为最常用的水溶性聚合物，其中泊洛沙姆407具有低温时为液体、温度升高时转变成凝胶的反向热胶凝特性。以泊洛沙姆407为基质制成的温度敏感凝胶以涂抹形式给药，与鼻腔接触后立刻转变成凝胶，能够延长药物在鼻腔膜滞留时间，提高药物生物利用度。故鼻安纳米乳凝胶以泊洛沙姆407为基质。

2.2.2 鼻安纳米乳凝胶基质制备采用冷法配制，称取35 g泊洛沙姆407于4 ℃下加入100 mL冰水搅拌分散后，静置溶解制备成泊洛沙姆凝胶基质，凝胶基质于冰箱中冷藏保存备用。

2.2.3 鼻安纳米乳即型凝胶制备将“2.1.5”项下制备的鼻安纳米乳于4 ℃下加入冷藏保存的泊洛沙姆407凝胶基质搅拌均匀，即制备得薄荷脑、丁香酚浓度标示量分别为0.789 mg·mL-1和0.195 mg·mL-1的鼻安纳米乳即型凝胶。

2.3 鼻安纳米乳即型凝胶含量测定

2.3.1 GC色谱条件[10]色谱柱：DB-WAX；柱温程序升温，140 ℃保留15 min，再以15 ℃·min-1升至230 ℃；以氢火焰离子化器为检测器，温度250 ℃；柱流量：1 mL·min-1；进样口温度：200 ℃；载气为氮气，进样量为1 μL；尾吹30.0 mL·min-1。

2.3.2 内标液制备称取水杨酸甲酯约0.2 g，精密称定，置于100 mL容量瓶中，加无水乙醇定容，制成浓度为 2.268 mg·mL-1的内标溶液。

2.3.3 对照品溶液制备称取薄荷脑对照品约0.1 g，精密称定，置100 mL容量瓶中，加无水乙醇定容，制成1.04 mg·mL-1的薄荷脑对照品溶液。同法取丁香酚对照品约0.025 g，精密称定，置于100 mL容量瓶中，加无水乙醇定容，制成0.256 mg·mL-1的丁香酚对照品溶液。

2.3.4 混合对照品溶液制备精密移取薄荷脑对照品溶液及丁香酚对照品溶液各1 mL，置于10 mL容量瓶中，加入上述内标液1 mL，加无水乙醇定容。

2.3.5 供试品溶液制备精密量取鼻安纳米乳即型凝胶10 mL，置于50 mL圆底烧瓶中，加入0.25 g·mL-1硫酸钠10 mL，连接挥发油提取器和回流冷凝管，加热回流1 h，放冷后回收油层，漏斗过滤后置于50 mL容量瓶中，精密加入内标液5mL，加无水乙醇定容[11]。

2.3.6 阴性对照品溶液制备按照鼻安纳米乳即型凝胶制备方法分别制备不含丁香酚和薄荷脑的阴性样品，按照供试品溶液制备方法制备阴性样品溶液。

2.3.7 线性关系考察精密吸取薄荷脑、丁香酚对照品溶液0.5、1、2、2.5、4、5 mL，置于10 mL容量瓶中，并分别加入内标液2 mL，加无水乙醇稀释至刻度，各取1 μL进样。以薄荷脑与内标物峰面积比为纵坐标、薄荷脑质量浓度为横坐标，进行线性回归，得回归方程：Y=1.845 3X+0.034 3，r2=0.999 9，表明薄荷脑在0.052～0.52 mg·mL-1浓度范围内与其峰面积积分线性关系良好。同理，以丁香酚与内标物峰面积比为纵坐标，丁香酚质量浓度为横坐标，进行线性回归，得回归方程：Y=1.645 2X-0.158 2，r2=0.999 8，表明丁香酚在0.012 8～0.128 mg·mL-1浓度范围内与其峰面积积分线性关系良好。

2.3.8 专属性试验分别精密量取薄荷脑、丁香酚混合对照品溶液，供试品溶液，阴性溶液各1 μL，分别注入气相色谱仪，记录色谱，见图2。根据图谱可知，供试品与对照品峰在相应位置均有色谱峰，阴性样品无干扰，说明此法测定鼻安纳米乳即型凝胶中的薄荷脑和丁香酚含量符合定量分析要求。

2.3.9 精密度试验分别取薄荷脑、丁香酚对照品溶液1 μL，重复进样6次，测得薄荷脑和丁香酚的峰面积与内标峰面积之比的RSD分别为3.451%和2.847%。

2.3.10 重复性试验取同一批号鼻安纳米乳即型凝胶6份按供试品溶液的制备方法制备溶液，测定含量。6份样品的平均含量RSD分别为薄荷脑3.65%、4.13%。

a.薄荷脑；b.丁香酚；c.水杨酸甲酯(内标)

2.3.11 稳定性试验取同一供试品溶液，分别于放置0、6、12、24、36、48 h进样测定含量，薄荷脑平均含量RSD为2.67%，丁香酚平均含量RSD为3.45%，表明48 h内薄荷脑和丁香酚稳定性良好。

2.3.12 回收率试验精密移取同一批号鼻安纳米乳即型凝胶10 mL，共6份，分别加入浓度为1.04 mg·mL-1薄荷脑对照品溶液5 mL、浓度为0.256 mg·mL-1丁香酚对照品溶液10 mL，按供试品溶液制备方法制备供试品，按照“2.3.1”项下方法进行含量测定，结果薄荷脑加样回收率平均值为98.5%，RSD=2.561%(n=6)，丁香酚加样回收率平均值为97.7%，RSD=3.694%(n=6)，表明本方法符合定量分析要求。

2.3.13 样品含量测定取3批鼻安纳米乳即型凝胶样品，按照“2.3.5”项下方法制备供试品，按气相色谱条件测定含量(标示含量%)，3批样品平均含量分别为99.7%、99.2%、98.9%。