明 明，武 爽，杨立国，2，代那音台，2，苏都那布其，扎拉嘎白乙拉，2*

(1.内蒙古蒙医药工程技术研究院，内蒙古 通辽 028000；2.内蒙古民族大学 蒙医药学院，内蒙古 通辽 028000；3.库伦旗蒙医医院，内蒙古 通辽 028000)

棘豆止咳散为内蒙古通辽市库伦旗蒙医医院的医院制剂，是由甘草、川贝母、多叶棘豆、石膏等4味药组成，对于多种咳嗽均具有明显疗效，且价格低廉，无毒副作用，老人和儿童均可使用[1]。多叶棘豆作为其中一味重要组成药物，为豆科植物多叶棘豆Oxytropismyriophylla的干燥全草[2]，但由于此药材受产地、气候等条件影响，不同批次药材所含化学成分差异较大。为了有效控制各批次多叶棘豆药材的质量，考虑到多叶棘豆中主要化学成分为黄酮类[3-10]，本研究利用紫外分光光度法对其总黄酮含量进行测定，并进行方法学考察，报道如下。

1 仪器与材料

FW-177高速万能粉碎机(天津市泰斯特仪器有限公司)；752-PC紫外可见分光光度计；HW-526数显恒温水浴锅(上海恒科学仪器有限公司)；BS224 S分析天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司)；亚硝酸钠(天津市永大化学有限公司)；硝酸铝(天津市大茂化学试剂厂)；氢氧化钠(天津市大茂化学试剂厂)；95%乙醇(天津市永大化学有限公司)；其他试剂均为分析纯。实验用多叶棘豆药材由赤峰荣兴堂药业有限责任公司蒙中药饮片厂提供(批号：1710013)；芦丁对照品购于上海诗丹德标准技术股份有限公司(批号：5718)。

2 方法与结果

2.1 供试品溶液的制备

取粉碎过40目筛的多叶棘豆药材粉末约5 g，共6份，各加入50 mL 65%乙醇浸泡，称定重量，随后加热回流2 h，取下放冷，再次称定重量，用65%乙醇补足减失的重量，过滤，残渣加50 mL 65%乙醇，再次称定重量，继续加热回流2 h，取下放冷，称定重量，用65%乙醇补足减失的重量，过滤。合并两次滤液，摇匀即得供试品溶液。

2.2 对照品溶液的制备

精密称定10.08 mg芦丁对照品，置于50 mL量瓶中，加入65%乙醇溶解，并稀释至刻度，配置成0.2 mg/mL标准品，冷藏备用[11]。

2.3 标准曲线的绘制

从不同浓度(0.02 mg/mL、0.04 mg/mL、0.06 mg/mL、0.08 mg/mL、0.1 mg/mL、0.12 mg/mL)配制的标准品溶液中精密量取1 mL，分别置于10 mL量瓶中，加入5%亚硝酸钠溶液0.3 mL，静置6 min后，再加入10%硝酸铝0.3 mL，静置6 min，最后加入4%氢氧化钠试液4 mL，加入65%乙醇至刻度，摇匀，放置15 min。采用紫外分光光度法，以65%乙醇为参照，在510 nm处测得吸光度，以标准溶液浓度(X)为横坐标，吸光度(Y)为纵坐标，绘制标准曲线。得回归方程：Y=11.49X+0.0179，r=0.9995。结果表明，芦丁对照品在0.01～0.08 mg/mL范围内线性关系良好，如图1所示。

图1 芦丁标准曲线

2.4 方法学考察

2.4.1 精密度试验 精确吸取上述供述品溶液1 mL，参照“2.3”项的制备方法显色及测定吸光度，连续测定6次，RSD为0.36%，结果表明，此方法精密度良好。

2.4.2 稳定性试验 在室温条件下，精确吸取上述供试品溶液1 mL，并参照“2.3”项的制备方法显色后，放置0、5、10、15、20、25 min时测定其吸光度，计算RSD为2.29%。结果表明供试品溶液在25 min内稳定性良好。

2.4.3 重复性试验 取同一批多叶棘豆药材，按照供试品溶液的制备方法制得6份供试品溶液，各取1 mL，并参照“2.3”项的制备方法显色及测定吸光度，计算所得总黄酮的平均含量为0.332 mg/g，RSD为2.54%。表明此方法重复性良好，见表1。

表1 重复性实验结果

2.4.4 加样回收率试验 精确吸取已知含量的多叶棘豆供试品溶液0.5 mL，共6份，分别添加0.2 mg/mL的芦丁标准品溶液0.5 mL，并参照“2.3”项的制备方法显色及测定吸光度，并计算回收率。平均回收率为94.66%，RSD为2.46%。说明此方法具有良好的回收率，见表2。

表2 加样回收率实验结果

2.5 多叶棘豆总黄酮含量测定

分别称取5.000 8 g、 4.999 1 g、 5.001 2 g、 4.999 6 g、5.000 9 g、5.001 7 g，共6份多叶棘豆样品，按照前述方法测定多叶棘豆中总黄酮含量。实验结果表明，多叶棘豆供试品溶液6次测定的总黄酮平均含量为0.332 8 mg/g。见表3。

表3 样品含量测定结果

3 讨论

目前，内蒙古蒙药材标准中并未对多叶棘豆总黄酮含量的测定方法进行收录，本研究建立了多叶棘豆总黄酮含量的测定方法，可用于多叶棘豆药材质量控制。

本研究对同一批次产自内蒙古地区的多叶棘豆进行了实验研究，结果表明多叶棘豆中总黄酮平均含量为0.332 8 mg/g。在方法学考察中，加样回收率的平均回收率为94.66%，RSD为2.46%，重复性RSD为2.54%。综上所述，紫外分光光度法在多叶棘豆总黄酮含量测定中结果稳定，重现性好，可以用于棘豆止咳散中多叶棘豆的质量控制。