林东昊，茅人飞

（1.上海师范大学生命科学学院，上海200234；2.上海瀛洲西红花种植专业合作社，上海202155）

藏红花为鸢尾科植物番红花（Crocus sativus L.）的干燥柱头，又名西红花、番红花，出产于伊朗、希腊、西班牙、印度等地，因最早是由中东地区经西藏传入我国，故而得名藏红花。藏红花是世界著名的天然香料、食用染料，也是名贵的中草药。在我国，藏红花作为食用香辛料和调味品收载于GB/T 12729.1-2008《香辛料和调味品名称》，作为中药材收载于《中华人民共和国药典》一部[1]中。藏红花具有独特的感官特性和品质，具有活血化瘀、凉血解毒、解郁安神等功效。近年来，国内外对藏红花进行了多方面的研究，发现其具有相当广泛的药理作用，能有效清除氧自由基[2-3]；治疗血栓、高血脂、动脉粥样硬化、肝纤维化[4-7]；改善糖尿病和药物等引起的脑功能障碍、认知障碍[8-11]；抑制肿瘤细胞增殖[12-13]；增强骨髓间充质干细胞的成骨分化[14]；改善糖尿病患者的肾功能损害[15]；保护视神经、视网膜[16-17]；抗焦虑抗抑郁[18]；抵抗UVB 引起的皮肤光老化[19]；抗衰老等，在诸多方面显示出了良好的药理活性。藏红花始载于唐代的《本草拾遗》（时名“郁金香”），在我国有着历史悠久的传统食用习惯，中医药典籍中未有毒性记录。藏红花是一朵花中雌蕊的三根柱头，产量极低，每公斤藏红花约有10 万根柱头，故弥足珍贵，有着“植物黄金”之称。在我国，藏红花长期依靠进口，直至20 世纪80年代，上海地区才首先引种成功，之后在江浙等地有零星种植，并逐渐发展。现在藏红花已成为长三角地区高附加值经济作物进行种植。

商品藏红花按照来源不同分为进口花和国产花两大类，气候条件不同，尤其是栽培方式的显著不同，采用“大田培育大球茎，室内培育大花蕊”的二段式栽培模式生产的国产花，其柱头顶端喇叭口大、粗壮、长度25 mm～40 mm，色泽深红；进口花的柱头顶端喇叭口较小、细弱，长度10 mm～25 mm。根据现代化学成分的研究，藏红花含有糖苷、萜类、黄酮、蒽醌等一百多种化合物[20]，其中西红花苷（藏红花素）是其中含量最高的一类活性成分，藏红花质量的优劣与西红花苷的含量密切相关[21]，在国内外通常以西红花苷-Ⅰ和西红花苷-Ⅱ的含量来评价藏红花的质量[22]。而在藏红花国际标准（ISO 3632-1：2011）中，以藏红花香味强度（藏红花苦素）、芳香度（藏红花醛）和色度（藏红花素）3 个特征参数作为评价指标，进行藏红花质量分级。本研究参考了《中国药典》一部以及藏红花国际标准（ISO 3632-2：2010）的试验方法，采用高效液相色谱（high performance liquid chromatography，HPLC）法测定藏红花中西红花苷-Ⅰ和西红花苷-Ⅱ的含量，采用紫外/可见分光光度法测定藏红花的3 个特征参数，为评价国内外不同来源藏红花的品质提供理论依据。

1 仪器与材料

1.1 仪器

Agilent 1100 高效液相色谱仪（G1311A 四元泵、G1313A 自动进样器、G1322A 在线脱气机、G1316A 柱温箱、G1314A 紫外检测器）：美国Agilent 公司，GM-0.33Ⅱ隔膜真空泵：天津市腾达过滤器件厂；UV-2600紫外可见分光光度计：岛津仪器（苏州）有限公司；Sartorius BT-124S 电子天平：北京赛多利斯仪器系统有限公司；Anke TGL-16C 台式离心机：上海安亭科学仪器制造厂；USC-702 超声波清洗器：上海波龙电子设备有限公司。

1.2 试验材料

西红花苷-Ⅰ对照品（批号111588-201202，供含量测定用，含量以91.1%计）、西红花苷-Ⅱ对照品（批号111589-201304，供含量测定用，含量以92.4%计）：中国食品药品检定研究院；蒸馏水：屈臣氏集团；甲醇：色谱纯，美国TEDIA；乙醇：分析纯，江苏强盛功能化学股份有限公司。

藏红花供试品：来源于上海崇明庙镇（1#）、上海崇明建设镇（2#）、浙江湖州（3#）、浙江建德（4#）、江苏南通（5#）、江苏东台（6#）、伊朗 ESFEDAN SAFFRON（7#）、伊朗BADIEE SAFFRON（8#）、散装进口西红花（四川荷花池中药材市场（9#）和安徽亳州中药材市场（10#），经上海中医药大学李俊松高级实验师鉴定均为鸢尾科植物番红花（Crocus sativus L.）的干燥柱头。

2 方法与结果

2.1 HPLC法测定西红花苷-Ⅰ和西红花苷-Ⅱ的含量

2.1.1 供试品溶液的制备

取已干燥藏红花适量，置研钵中，研细，取10 mg，精密称定，置50mL棕色容量瓶中，加稀乙醇（取乙醇529 mL，加水至1 000 mL）适量，于冰浴中避光超声处理（58 kHz，300 W）20 min，放置至室温，加稀乙醇定容至刻度。摇匀，16 000 r/min 离心，取上清液，即得。

2.1.2 对照品溶液的制备

2.1.2.1 对照品贮备液的制备

精密称取西红花苷-Ⅰ对照品0.014 87 g、西红花苷-Ⅱ对照品0.010 34 g，分别置25mL棕色容量瓶中，加适量稀乙醇溶解，并稀释至刻度，制备成对照品贮备液（分别含西红花苷-Ⅰ541.9 μg/mL，含西红花苷-Ⅱ382.2 μg/mL）。

2.1.2.2 混合对照品溶液的制备

分别精密移取西红花苷-Ⅰ、西红花苷-Ⅱ对照品贮备液一定体积至同一容量瓶内，加稀乙醇，定容至刻度，依次配制成6 个不同浓度的混合对照品溶液。

2.1.3 色谱条件

色谱柱LunaC18（2）（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇-水（45∶55，体积比）；检测波长：440 nm；流速：1.0 mL/min，柱温：30 ℃。

2.1.4 方法学考察

2.1.4.1 线性关系考察

精密移取6 个不同浓度的混合对照品溶液，按2.1.3 色谱条件进行测定，分别以对照品峰面积为横坐标，浓度为纵坐标，绘制标准曲线，得西红花苷的回归方程。西红花苷线性关系结果见表1，HPLC 色谱图见图1。

表1 西红花苷-Ⅰ和西红花苷-Ⅱ的线性关系试验结果Table 1 Regression equations，correlation coefficients，and linearity ranges of crocinⅠ and crocin Ⅱ

图1 西红花苷-Ⅰ和西红花苷-Ⅱ的HPLC 色谱图Fig.1 HPLC chromatogram of crocin-Ⅰ and crocin-Ⅱ

2.1.4.2 加样回收试验

取2#供试品约15 mg，一式3 份，精密称定，置100mL容量瓶内，加适量稀乙醇溶解，分别精密加入西红花苷-Ⅰ、西红花苷-Ⅱ对照品贮备液1.5、3.5、5.0 mL，摇匀，按2.1.1 供试品溶液制备方法，制备样品溶液。按2.1.3 色谱条件测定，结果西红花苷-Ⅰ的平均回收率为99.81 %，相对标准偏差（relative standard deviation，RSD）1.50%，西红花苷-Ⅱ的平均回收率为97.47%，RSD 0.95%。

2.1.4.3 精密度试验

1）对照品溶液

移取混合对照品溶液（西红花苷-Ⅰ浓度：27.093 μg/mL、西红花苷-Ⅱ浓度：11.465 μg/mL），一式3 份，按2.1.3 色谱条件测定，测得对照品西红花苷-Ⅰ和西红花苷-Ⅱ峰面积RSD 分别为0.57%、0.53%。

2）供试品溶液

取2#供试品，一式六份，精密称定，按2.1.1 法制备供试品溶液，按2.1.3 色谱条件测定，测得供试品中西红花苷-Ⅰ和西红花苷-Ⅱ含量RSD 分别为0.81%、0.80%。

2.1.5 不同来源藏红花中西红花苷的含量测定

取10 批次国内外不同来源的藏红花，按2.1.1法制备供试品溶液，按2.1.3 色谱条件测定，结果见表2。

表2 国内外不同来源藏红花中西红花苷-Ⅰ、西红花苷-Ⅱ含量测定结果Table 2 Quantitative determination results of crocin-Ⅰand crocin-Ⅱin saffron from different source at home and abroad

2.2 紫外/可见分光光度法测定不同来源藏红花的3个特征参数指标

2.2.1 供试品溶液的制备

取已干燥藏红花适量，置研钵中，研细，取50 mg，精密称定，置100mL容量瓶中，加水90mL于冰浴中避光超声处理（58 kHz，300 W）20 min，放置至室温，加水定容至刻度，摇匀。精密移取10 mL，置100mL容量瓶中，加水至刻度。摇匀，16 000 r/min 离心，取上清液，即得。

2.2.2 测定

取供试品溶液于200 nm～700 nm 波长进行扫描，以水为空白，记录440、330、257 nm 处的吸光度。根据吸光度、称样量、干燥失重计算标示藏红花香味、芳香度和色度的3 个特征参数，按《中华人民共和国国家标准藏红花第一部分：规格》中化学指标标准判定供试品的等级分级，结果见表3，图2。

表3 国内外不同来源藏红花特征参数测定结果与对应等级Table 3 The determination results of characteristic parameters in saffron from different source at home and abroad

图2 藏红花特征参数测定的紫外-可见分光光谱图Fig.2 UV/visible spectroscopic spectrum of characteristic parameters in saffron

3 结论与讨论

1）藏红花具有独特的色、香、味，其特征参数强度与产品质量密切相关。在藏红花国际标准（ISO 3632-1：2011，ISO 3632-2：2010）中，采用紫外-可见分光光度法对标示藏红花色度、芳香度和香味的3 个特征参数指标进行测定，以评定产品质量等级。其中，色度以藏红花素（西红花苷）、芳香度以藏红花醛、香味以藏红花苦素为代表，最大吸收波长分别为440、330、257 nm。弥补了目前HPLC 法只测定西红花苷-Ⅰ、西红花苷-Ⅱ的局限性。本研究按该方法进行了测定，结果表明440 nm 的最大吸收值与HPLC 的测定结果呈正相关，与文献报道的一致[23]。

2）西红花苷-Ⅰ和西红花苷-Ⅱ作为藏红花的质控指标，在《中国药典》一部中规定两者含量之和不得少于10.0%（按照干燥品计算）。本研究对西红花苷-Ⅰ、西红花苷-ⅡHPLC 含量测定方法进行了方法学考察，实验表明结果准确、可靠。国内外不同来源的西红花虽然含量差异较大（12.56%～23.20%），但是均符合中国药典标准。同时，按照藏红花国际标准（ISO 3632-1：2011）测定了藏红花的3 个特征参数，以色、香、味指标成分进行产品分级，国产西红花的质量明显优于进口西红花，散装进口花的质量参差不齐。

3）本文研究结果表明，国产藏红花中活性成分西红花苷Ⅰ和西红花苷Ⅱ的含量明显高于进口藏红花。这主要源于国内外藏红花的不同栽培模式。在中东地区，藏红花普遍采用“露地栽培”模式，即藏红花自种球种植于地下至开花采收整个过程，皆在大田中进行，连续耕作。由于气候条件的差异，我国则采用了“露地种植球茎，室内培育鲜花”的栽培模式，并通过人工干预控制单个种球芽的数量，防止了球茎的退化，实现了生产大球茎的目标。大球茎开出的花数量多、质量好，造就了国产藏红花优异的品质——国产藏红花花蕊粗大、颜色深红、活性成分含量高，而进口花花蕊细短，颜色较浅、活性成分含量低，两者品质差异显著。

4）为了准确评价不同产地藏红花的质量，试验中的国产藏红花是直接从产地藏红花基地或种植农户处购买，伊朗进口西红花通过其品牌代理商购买，散装藏红花在四川荷花池和安徽亳州中药材市场采购。所有藏红花供试品均为2014年产新的全红精制花，经鉴定均为正品。

5）藏红花不仅是香料和色素，还具有广泛的药理活性，国内外对其研究方兴未艾。作为一种高附加值的经济作物，目前已在上海、浙江、江苏、安徽等地引种成功，其中上海崇明为国内西红花的主产区之一，出产的藏红花质量优异，不仅西红花苷含量高，而且其色度、芳香度和香味均达到国际西红花等级分类高等级标准。本研究通过国内外不同来源藏红花有效成分含量的比较，为该产品扩大市场应用提供了数据支持。