丁煜哲 田 坤

（西安高新第一中学 陕西西安 710000）

1 引出问题

盐代谢紊乱是目前公认的对心脑血管和肾脏产生损害，是引起冠心病、中风和肾衰竭等的重要风险因子［1-2］，人们选择降低食盐的摄入量，以减少盐代谢紊乱可能带来的疾病风险。然而，在已有的细胞与动物研究中，食盐的使用浓度非常宽泛（20～160 mmol／L）［3-5］，高浓度食盐的使用会引起研究系统内的渗透压改变，从而过高评估食盐所带来的危害。如何选取合理的食盐刺激与给予浓度，是正确评估食盐毒性的关键因素。本项目利用人血管内皮细胞系（HUVEC），对比了不同盐浓度刺激下的细胞形态改变与细胞凋亡情况，证明了选择合理盐浓度刺激的重要性；同时根据筛选的最优盐浓度，检测了在该浓度刺激条件下，食盐对细胞活力、增殖以及凋亡的影响。食盐的主要成分是氯化钠，为了便于控制浓度，本文选用分析纯的氯化钠作为食盐用于之后的研究中。

2 实验材料与方法

2.1 实验材料 HUVEC 细胞系购于上海生命科学院菌种保存中心；氯化钠、蔗糖等试剂购于国药集团；Cell Counting Kit-8 细胞增殖试剂盒及Annexin-V&PI 细胞凋亡试剂盒购于碧云天生物科技有限公司；主要科研平台借助西安交通大学医学部基础医学院生物化学与分子生物学系实验室。

2.2 实验方法

2.2.1 倒置显微镜细胞形态观察 以1×105个／孔为浓度，将细胞接种于12 孔细胞培养板，同时给予不同浓度（0 mmol／L、20 mmol／L、40 mmol／L、60 mmol／L、80 mmol／L 和160 mmol／L）的食盐刺激，分别培养12 h、24 h、48 h 和72 h 进行观察、拍照。

2.2.2 Countstar 细胞活力评估 以1×105个/孔为浓度，将细胞接种于12 孔细胞培养板，分别给予60 mmol／L蔗糖和60 mmol／L 氯化钠刺激，24 h 后胰酶消化收集细胞，用0.4%台盼蓝染色后，5 min 内在Countstar 自动细胞计数仪分析。……