陈 志，丁可欣，林霞琳，黄潇航，黄志坚，殷光文

(福建农林大学动物科学学院/ 福建省动物药物工程实验室，福建福州350002)

鸡球虫病是对全球禽养殖业危害很大的一种寄生虫病，其中巨型艾美耳球虫(Eimeria maxima)是较常见的鸡球虫。E.maxima具有很好的免疫原性，能够对其它鸡球虫产生交叉免疫力[1]。该球虫感染鸡所产生的抗体，能够作为母源抗体传递给后代，对子代产生持续约3 个月的保护力[2-3]。

疫苗免疫是防治鸡球虫病的有效手段[4-5]。免疫相关蛋白1(IMP1)作为E.maxima中的蛋白，具有良好的免疫原性和免疫保护性[6]。纤维连接蛋白外域A (EDA)作为分子佐剂，能够通过受体4 (TLR4)把抗原传递给树突细胞(DCs)以增强其免疫原性[7-10]。枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)作为异源蛋白表达系统具非致病性、对人畜无害、完善的分泌系统、利于外源基因产物的纯化和回收等特性[11]。本实验结合枯草芽孢杆菌作为外源基因呈递载体的优势，再将 EDA 作为 EmIMP1 的佐剂，制备 pHT01-EDAEmIMP1 和pHT01-EmIMP1 胞内重组表达质粒，对该重组枯草芽孢杆菌的免疫效果进行评价，为鸡球虫疫苗研究奠定基础。

1 材料与方法

1.1 主要实验材料 1 日龄的海兰褐雄蛋鸡，一级(CV)实验动物，饲养于经过严格杀菌消毒的环境，严格分组并给予足水足料喂养，1 周龄时抽样检查粪便中是否感染任何球虫，确保其未感染。

pET28a-EDA-EmIMP1 和 pET28a-EmIMP1 重 组质粒由本实验室构建保存；1012 枯草芽孢杆菌菌株和pHT01 质粒均购自普健生物(武汉)科技有限公司；pEASY-Blunt Simple 载体、Trans1-T1 抗噬菌体化学感受态细胞、质粒提取试剂盒、PVDF 膜、His 小鼠源单克隆抗体(MAb)、辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠IgG (IgG-HRP)均购自北京全式金生物技术有限公司；……