李 鹤，党光辉，于申业，程玉笛，刘虹秀，宋宁宁，陈利苹，刘思国

(中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/ 动物细菌病创新团队，黑龙江哈尔滨150069)

结核病(TB)每年感染约一千万人并造成近140万患者死亡，同时也是艾滋病病人在免疫力低下时主要的感染源，可以引发细菌病毒混合感染造成患者死亡[1]。近年来，不合理用药导致了多重耐药结核(MDR-TB)和广谱耐药结核(XDR-TB)的出现，更加重了公共卫生安全隐患。卡介苗(Mycobacterium bovis Bacillus Calmette-Guerin，BCG)是目前唯一可以用于人TB 预防的商品化疫苗，但0～80 %的不稳定保护率使其对疾病的防控存在一定风险[2]，因此新型疫苗成为该病疫苗领域的重点研发对象，如含有Ag85A 的重组活载体疫苗、DNA 疫苗等[3]。考虑到活苗存在毒力返强、成本过高以及不适用于免疫缺陷病人等缺点，只含有保护性抗原的基因工程亚单位疫苗因不具有感染性风险便应运而生。较为成功的亚单位疫苗如ESAT-6/Ag85B，Mtb32/Mtb39基因融合亚单位疫苗目前也即将进入一期临床试验阶段[4]。但单一的基因重组亚单位疫苗在无佐剂的情况下免疫原性不高[5]，因此本研究采用小鼠模型评价菌蜕(ghost)佐剂对结核分枝杆菌(MTB)4 种抗原的免疫增强作用并与弗氏不完全佐剂(IFA)进行比较，为新型抗TB 亚单位疫苗的研制提供新的思路。

1 材料与方法

1.1 主要实验材料 110 只6 周龄～7 周龄SPF 级雌性BALB/c 小鼠，购自北京维通利华有限公司。Rv3802c、 Rv0394c (SEC)、 Rv0199 和 E6c10 4 种MTB 蛋白(1 mg/mL)，肠炎沙门氏菌DH091 菌蜕产物(108cfu /mL)，均由本实验室制备保存。IFA 购自Sigma 公司；96 孔酶标板购自Costar 公司；……