田佳琪，姚亚辉，赵化丹，李 敏，朱茗莉，马红霞，高云航*

(1.吉林农业大学动物科学技术学院，吉林长春130118；2.辽源市东丰县东丰广播电视台，吉林辽源136300)

化脓隐秘杆菌(Trueperella pyogenes)属隐秘杆菌属，作为一种条件致病菌可以在猪、鹿、羊、牛等多种哺乳动物中广泛传播，造成重大损失。现今，对T.pyogenes的临床检测手段仅为PCR 检测。酶联免疫吸附试验(ELISA)是临床检测抗体的可靠手段，其主要原理是将抗原包被液结合固相载体表面，利用抗原与抗体之间的特异性结合对免疫反应定性和定量检测[1]。超声裂解的全菌蛋白作为包被抗原具有良好的可操作性，Miranda 等以超声裂解后的羊泰勒虫为包被抗原建立的间接ELISA 方法检测羊血液抗体[2]；马福利等以超声裂解副猪嗜血杆菌为包被抗原建立的间接ELISA 检测方法[3]；曹俊、李娇阳、李富祥等均以超声裂解的方式处理抗原，并作为包被液建立间接ELISA 检测方法，结果显示经过超声裂解的包被液具有较好的稳定性[4-6]。综上所述，超声裂解抗原作为间接ELISA(iELISA)的抗原包被液具有操作方法便捷、测试结果较稳定等优点。本研究通过超声破碎猪源T.pyogenesTP-2849菌株获得包被抗原，建立T.pyogenesiELISA 检测方法，对T.pyogenes抗体的检测和血清流行病学调查具有重要意义。

1 材料与方法

1.1 主要实验材料 TP-2849 株猪T.pyogenes由本实验分离鉴定并保存。T.pyogenes、副猪嗜血杆(HPs)、猪大肠杆菌(E.coil)、猪巴氏杆菌(PM)、猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸道综合征病毒(PRRSV)、猪细小病毒(PPV)、猪伪狂犬病毒(PRV)阳性血清均由本实验室制备保存。以上8 种病原阴性血清均购自中国农业科学院兰州兽医研究所。……