吴同垒，陈 娟，于秀建，张志强，李佩国*，朱国强

(1.河北科技师范学院，河北秦皇岛066004；2.扬州大学，江苏扬州225009)

肠炎沙门菌(Salmonella entericaserovarEnteritidis)是沙门菌的重要成员，可以引起家禽短暂的全身性感染，表现为肠道感染的亚临床症状，而对于被感染的母鸡则表现为慢性长期带毒[1-2]，污染鸡蛋、鸡肉，造成人类对沙门菌的感染[3-4]。因此，控制鸡群中肠炎沙门菌的流行，是控制人类对其感染的重要前提。

肠炎沙门菌为兼性胞内寄生菌，其毒力主要是协助其能够在细胞内存活并增殖。在这个过程中，沙门菌要面临多种不良环境，如胃肠道中的酸碱应激、细胞中的氧化应激和热应激等[5]。iroB 基因编码C-末端糖基转移酶，有研究表明在沙门菌感染细胞过程中iroB 基因高表达，因此推测其在沙门菌的胞内生存和抗应激能力中具有重要作用[6]。本研究利用λ- 同源重组技术对肠炎沙门菌iroB 基因进行敲除，并进行体外应激试验、药敏试验和胞内存活试验，验证IroB 在沙门菌致病机制中的作用。

1 材料与方法

1.1 主要实验材料 鼠源巨噬细胞Raw264.7 由吉林农业大学单晓枫教授惠赠。野生菌株C50336 (简称 WT)、肠炎沙门菌 c50336 感受态细胞、质粒pKD3、pKD46、pCP20、pBBR322 均由扬州大学朱国强教授惠赠。TaqDNA 聚合酶、dNTP、DNA Maker 均购自宝生物工程(大连)有限公司；T4 连接酶和限制性内切酶、蛋白Marker 均购自Fermentas公司；L- 阿拉伯糖购自 Sigma 公司；铁螯合剂-DAP (2-2'-联吡啶)购自Sigma 公司；ATB 生化自动鉴定系统及ID32E 生化鉴定试纸条购自法国Biomerieux 公司。

1.2 λ-Red 同源重组引物的设计与合成 根据NCBI 中登录的沙门菌基因组序列(CP028151.1)，利用Primer Premier 5 设计引物。……