莫远亮，王郁石，王继文

（四川农业大学动物科技学院/畜禽遗传资源发掘与创新利用四川省重点实验室，成都 611130）

实时荧光定量聚合酶链式反应（real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR）是基于荧光信号的变化实时监测PCR扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化，通过Cq值和标准曲线的关系对起始模板进行定量分析[1]的方法，该方法具有快速、灵敏性高、特异性强、通量大等特点，在当今生物学研究中被广泛应用。在RT-qPCR应用中，由于不同样品间RNA的产量、质量、反转录效率及PCR反应扩增效率等存在差别，从而影响定量分析的准确性，因此需要引入稳定表达的内参基因予以校正[2]。理想的内参基因应该是在所研究的组织、细胞和各种实验条件下均能够恒定表达的基因[3]。但是，由于内参基因的表达具有物种、组织及阶段特异性，不存在通用于多种细胞、组织和实验条件的内参基因。如若使用未经筛选验证的内参基因进行校正，则目标基因表达水平的定量分析可能出现较大的偏差[4]。因此，需要根据细胞和组织类型、细胞增殖和器官发育的阶段、实验条件的不同，筛选出相对合适的内参基因及确定其数目，对数据进行校正和标准化，以获得准确可靠的基因表达分析[5]。

KHAN等[6]在对牛的优势卵泡颗粒细胞的内参基因表达分析时发现，UBE2D2和EIF2B2在分娩期和卵泡成熟期表达较为稳定。BADDELA等[7]对牛的颗粒细胞在不同氧浓度和不同密度培养条件下做了内参基因的选择，发现TBP和B2M在2种条件下均能稳定表达。……