梁 军，孙锦霞 ，果 静，夏振华 *亚宝药业集团股份有限公司，山西运城 04460；北京亚宝药物研究院，北京 0

苯磺酸氨氯地平片（Amlodipinebesylate tablets）是由美国辉瑞制药公司在20世纪80年代中期研制成功的一种新型二氢砒啶类钙离子拮抗剂，主要用于治疗高血压和心绞痛，是目前治疗高血压病的首选药物之一。该药在合成时以及制剂的生产、贮存过程中，可能会产生工艺杂质和降解杂质（共有7个），分别为氨氯地平杂质 A、B、D、E、F、G、H。 因此控制这些杂质在本品中的含量对保证用药安全具有重要意义。其有关物质检测方法EP9.0[1]虽能够全部检出，但由于使用乙酸铵缓冲液且pH值为6.8左右，在该pH范围内流动相缓冲能力较弱，主要通过离子强度来达到杂质分离的目的，所以耐用性极差，尤其是降解杂质D和工艺杂质A易发生重合或互换，给分析检测带来麻烦。而 ChP2015[2]、USP41[3]、JP17[4]等各国药典也均有收载，但不能对所有杂质进行有效分离或洗脱。也有文献[5]对所有杂质能够分离，但使用的是磷酸钠和甲醇体系，且甲醇比例高达90%，极易导致缓冲盐析出，给测定带来诸多困扰。其他文献[6]不能对所有杂质进行有效的分离或洗脱。

1 仪器与药品、试剂

安捷伦1260高效液相色谱仪；十万分之一电子天平（梅特勒-托利多仪器有限公司）。

氨氯地平杂质 A、B、D、E、F、G、H 对照品（深圳博泰尔公司）；苯磺酸氨氯地平对照品（中国食品药品检定研究院）；苯磺酸氨氯地平片（规格5 mg，批号1601201，亚宝药业）；甲醇、乙腈为色谱纯；磷酸、氨水为分析纯；水为纯净水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：C18（4.6 mm×250 mm，5μm）；流动相 A相：0.1%磷酸溶液（氨水调 pH 3.5）-乙腈-甲醇（80∶10∶10）；B 相，乙腈-甲醇（70∶30）[梯度洗脱程序：B 相，0～15 min（25%～45%），15～45 min（45%～75%），45～50 min（75%~25%），50～60 min（25%）]；检测波长：237nm；柱温：30℃；流速：1.2mL·min-1；进样量：20μL。

2.2 溶液的配制

2.2.1 稀释液 取流动相A和B，以75∶25比例混合，作为稀释液。

2.2.2 空白辅料溶液 称取按照处方比例混合的空白辅料细粉适量，置50 mL量瓶中，加稀释液约40 mL，超声处理30 min，取出，放冷，用稀释液稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为空白辅料溶液。

2.2.3 氨氯地平对照品溶液 取苯磺酸氨氯地平对照品适量，精密称定，用稀释液配成浓度为10μg·mL-1的氨氯地平对照品溶液。

2.2.4 杂质对照品溶液 分别取氨氯地平杂质A、B、D、E、F、G、H 对照品适量，精密称定，分别用稀释液配成浓度为2μg·mL-1的杂质对照品溶液。

2.2.5 系统适用性溶液 称取苯磺酸氨氯地平对照品约14mg（相当含氨氯地平10mg），精密称定，置10mL量瓶中，加稀释剂适量使其溶解，再加入各杂质贮备液适量，用稀释液配成各杂质浓度分别为2μg·mL-1、氨氯地平浓度为1mg·mL-1的系统适用性溶液。

2.2.6 供试品溶液 取本品1片（相当于含氨氯地平50 mg），置50 mL量瓶中，加稀释液40 mL，超声处理30 min，使其溶解，取出，放冷，用稀释液稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

2.3 方法学验证

2.3.1 专属性考察 在“2.1”色谱条件下依次进样稀释液、空白辅料溶液、系统适用性溶液、氨氯地平对照品溶液、各杂质对照品溶液和供试品溶液，结果表明，稀释液和空白辅料溶液在氨氯地平及其7个杂质出峰位置处均无显著色谱峰干扰。见图1。

图1 苯磺酸氨氯地平HPLC图谱

2.3.2 系统适用性考察 在“2.1”色谱条件下，对氨氯地平对照品溶液连续进样6针，峰面积RSD为0.1%，小于5.0%，在系统适用性溶液中，氨氯地平和各杂质间的最小分离度为2.47，大于1.5，该系统适用性良好。

2.3.3 检测限和定量限考察 取氨氯地平对照品溶液和各杂质对照品溶液，经逐级稀释制成检测限（LOD，S/N≥3）和定量限（LOQ，S/N≥10）溶液，在“2.1”色谱条件下进行检测，各组分的检测限浓度均小于供试品浓度的0.01%，各组分的定量限浓度均小于供试品浓度的0.03%，能够满足所有杂质的质量控制要求，方法灵敏度良好。见表1。

2.3.4 线性范围考察 取氨氯地平对照品溶液和各杂质对照品溶液适量，分别从各杂质定量限到限度浓度150%范围内，取不少于5个浓度的对照品溶液，按“2.1”色谱条件测定，以各对照品的峰面积为纵坐标（Y），以各对照品浓度为横坐标（X，μg·mL-1），得出各杂质的线性方程，结果表明，各杂质在定量限到限度浓度150%浓度范围内线性关系良好，截距均远小于杂质限度浓度下的峰面积的25%，最大的为杂质H，为2.1%，说明使用常见的一点标准浓度测定，给分析带来方便，且误差极小。见表2。

表1 各组分的检测限和定量限

表2 各组分的线性范围

2.3.5 校正因子的确定 根据“2.3.4”项下方法分别对各组分做两条线性回归方程，用氨氯地平与各杂质线性回归方程斜率比值计算杂质校正因子，取两次校正因子的平均值来确定各杂质的校正因子，经计算可知，杂质A、D、G、H的校正因子分别为0.7、2.2、0.8、1.3； 杂质 B、E、F 的校正因子均为 1.0。二次的校正因子的测定误差极小，说明该方法的耐用性好，使用自身对照准确度高。

2.3.6 精密度试验 由于样品中常不含有所有杂质，为证明该法对所有符合质量标准的产品适用，在测定样品时同时测定加入杂质 （加入100%限度）的样品，在“2.1”色谱条件下由两位实验员分别于不同时间使用不同仪器和色谱柱、平行制备6份供试品溶液和6份限度杂质100%供试品溶液，结果显示，在实验员A和B的6份供试品溶液中，杂质D%和总杂%的 RSD（n=6）和 RSD（n=12）均小于 18.0%；在6份杂质限度100%供试品溶液中，各杂质回收率均在 80.0%～120.0%，且 RSD（n=6）和 RSD（n=12）均小于10.0%，精密度良好，能够满足质量的控制要求。

2.3.7 准确度试验 在处方比例混合的空白辅料中，分别加入从LOQ到限度浓度150%范围的各组分，计算各加样回收率，各组分在LOQ水平对应回收率在86.5%~124.9%，在限度50.0%~150.0%对应得回收率在93.2%~115.7%，12份回收率的RSD%均小于7.3%，结果表明方法准确度较高。见表3。

表3 各组分加样回收率结果

2.3.8 溶液稳定性考察 取“2.2.3”配制的氨氯地平对照品溶液和“2.2.6”配制的供试品溶液，在“2.1”色谱条件下考察溶液稳定性，结果表明，氨氯地平对照品溶液在室温下放置69 h稳定性良好 （与0 h相比回收率为101.3%），供试品溶液在57 h内稳定性良好 （与0 h相比各杂质变化率均小于10.0%），溶液稳定性良好。

2.3.9 耐用性考察 通过调整色谱柱、柱温（±5℃）、波长（±2 nm）、流速（±0.1 mL·min-1）、缓冲液 pH 值（±0.2）、流动相比例（±3）等色谱参数后，系统适用性溶液各相邻峰间的最小分离度均大于1.5，且系统适用性良好，测得的供试品溶液含量与正常条件相比RSD均小于20.8%（杂质含量≤0.1%），在各组分加标100%供试品溶液中，各杂质的回收率与正常条件比较均小于5.9%，该方法耐用性良好。

3 讨 论

3.1 实验分别采用PTFE材质和尼龙6材质为滤膜进行吸附考察，发现后者过滤时出现保留时间为42 min的未知峰，且该峰与杂质A相邻，分离度大于2.2，经过查证为滤膜引入的峰，且与弃去初滤液的体积有关。滤膜材质选择不当，会产生杂质峰，且往往误认为是辅料产生的峰而作出不科学的判断。

3.2 在HPLC法测定有关物质时，多使用梯度洗脱，如果有机相甲醇、乙腈比例较高可能会有缓冲盐析出。本法在流动相A中含有一定的有机相，并改用磷酸的铵盐作为缓冲液，可有效地避免析出现象。

3.3 三乙胺是HPLC法常见的添加剂，但其噪音很大，而且对柱有一定的损害，现在使用封尾处理的色谱柱可以达到相同的效果，鉴于此没有采用《中国药典》[2]的三乙胺体系，各杂质及主成分峰对称性很好。