王建成 ，李 卫 ，张朝军 ，李 萍 ，陈 君 **中国药科大学 中药学院，南京 0009；浙江康莱特药业有限公司，杭州 3008

薏苡仁（Coicis Semen），又名薏仁、米仁，为禾本科植物薏苡Coix lacryma-jobi L.var.ma-yuen（Roman.）Stapf的干燥成熟种仁，具有利水渗湿、健脾止泻、排脓除痹、解毒散结等功效[1]。现代研究表明，薏苡仁主要含有脂肪油、甾醇、三萜、多糖及氨基酸等多种化学成分，具有抗氧化、抗炎、免疫调节、抗肿瘤、降血糖、利尿、调节脂质代谢等[2-4]药理活性。薏苡仁也是一种药食同源物品。

据报道，市场上发现的薏苡仁伪品有来源于同属植物的草珠子及小麦、大麦、高粱米[5]。为了准确区分真伪，保证薏苡仁的用药安全，本研究采用薄层色谱法、高效液相色谱指纹图谱法对薏苡仁和上述伪品进行系统研究，为其真品质量控制提供参考。

1 仪器与药品、试剂

数码相机500D（日本佳能公司）；CAMAG高效薄层色谱仪（Camag Auomatic TLC Sampler 4，CAMAG中国技术支持公司）；WD-9403A紫外仪（北京六一仪器厂）；Sartorius BSA124S电子天平（北京赛多利斯仪器有限公司）；KQ-5200B型超声波清洗器（昆山超声仪器有限公司）；20 cm×10 cm高效薄层板（TLC Silica gel 60 RP-18 F254S，德国 Merck 公司）；高效液相色谱仪为Shimadzu LC-20A HPLC系统（日本Shimadzu），包括LC20-AT二元泵、SIL-20A自动进样器、CTO-20A柱温箱、SPD-20A检测器和LC-Solution工作站。

对照品：三油酸甘油酯、亚油酸、棕榈酸、油酸（阿拉丁生化科技股份有限公司）；薏苡仁油和薏苡仁对照药材（中国食品药品检定研究院）。三亚油酸甘油酯、1，2-二亚油酸-3-棕榈酸甘油酯、1，2-二亚油酸-3-油酸甘油酯、1-棕榈酸-2-油酸-3-亚油酸甘油酯、1，2-二油酸-3-亚油酸甘油酯、1，2-二油酸-3-棕榈酸甘油酯为本实验室自制。所有对照品经HPLC-ELSD检测，纯度均在98%以上，符合定量要求。

甲醇、乙腈（色谱纯）；石油醚（60℃~90℃）、二氯甲烷、乙醇、乙酸乙酯、乙醚、丙酮、冰醋酸均为分析纯（南京化学试剂股份有限公司）；纯净水（市售）。

薏苡仁样品由康莱特药业有限公司提供，草珠子、小麦、大麦、高粱米均为市售，经中国药科大学生药学系李萍教授鉴定确认。见表1。

表1 样品产地

2 方法与结果

2.1 薄层色谱鉴别

2.1.1 对照品及对照药材溶液的制备 三油酸甘油酯对照品溶液：取三油酸甘油酯对照品适量，加石油醚 （60℃~90℃）溶解制成1 mL含2 mg的溶液，作为对照品溶液。薏苡仁油对照提取物：取薏苡仁油对照提取物适量，加石油醚（60℃~90℃）制成每毫升含10 mg的溶液，作为对照提取物溶液。

2.1.2 供试品溶液的制备 称取各药材粉末1.0 g（过65目筛），分别置于具塞锥形瓶中，加入石油醚5 mL，密塞，超声处理（功率 300 W，频率 40 kHz）15min，滤过，取续滤液作为各药材供试品溶液。

2.1.3 薄层色谱条件 在 《美国药典》40版相关标准的基础上，优化色谱条件，确定以十八烷基硅胶板作为固定相，以丙酮-冰醋酸（7∶3）为展开剂，展开两次，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯365nm下检视。

2.1.4 薏苡仁及其伪品薄层色谱鉴别 考虑薏苡仁中主要有效成分与对照品的易得性，选择三油酸甘油酯作为参照。如图1所示，在薄层色谱鉴别中发现，高粱米、小麦、大麦的色谱，在甘油三酯类条带区域与薏苡仁相比较暗，说明其甘油三酯类含量较低，同时在色谱条带的顶部，小麦、大麦与薏苡仁有明显区别，较易区分。伪品草珠子，其基源与薏苡仁属于同种的不同变种，在化学成分上十分接近，在薄层色谱中与对照提取物色谱条带一一对应，难以区分，可用高效液相色谱指纹图谱法鉴别。

图1 薄层色谱图

2.2 指纹图谱鉴别

2.2.1 液相色谱条件 色谱柱：Agilent Poroshell 120 EC-C8（3 mm×100 mm，2.7μm）；柱温：25℃；流速：0.3 mL·min-1，进样量：10 μL。蒸发光散射检测器（ELSD-LT Ⅱ）参数：温度45℃，增益值11，过滤值10，气体压力为4.0 bar。流动相：A相为纯水，B相为含 0.1%甲酸的甲醇-乙腈溶液（95∶5），梯度洗脱：0/10/25/65min，B相为85%/95%/100%/100%。

2.2.2 对照品溶液的制备 精密称取以下对照品：亚油酸 10.53 mg，棕榈酸 10.36 mg，油酸 10.68 mg，三亚油酸甘油酯4.47 mg，1，2-二亚油酸-3-棕榈酸甘油酯 4.82 mg，1，2-二亚油酸-3-油酸甘油酯15.38 mg，1-棕榈酸-2-油酸-3-亚油酸甘油酯4.76 mg，1，2-二油酸-3-亚油酸甘油酯 19.25 mg，1，2-二油酸-3-棕榈酸甘油酯5.67 mg，三油酸甘油酯10.13mg，分别用二氯甲烷溶解转移至50 mL量瓶中，并用甲醇定容至刻度，作为混合对照品溶液。

2.2.3 供试品溶液的制备 取薏苡仁药材粉末（过65目筛）500 mg，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，称定重量，超声处理（功率250 W，频率40 kHz）15 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液即得。

2.2.4 方法学考察

2.2.4.1 专属性：将10个对照品以及样品按照色谱条件进样分析，将薏苡仁药材和各对照品的色谱图在岛津数据处理软件Labsolution中合并。见图2。药材样品中各待测成分色谱峰与相应的对照品相对应。

图2 薏苡仁药材与混合对照品色谱图

图2 中序号1~10依次为亚油酸，棕榈酸，油酸，三亚油酸甘油酯，1，2-二亚油酸-3-棕榈酸甘油酯，1，2-二亚油酸-3-油酸甘油酯，1，2-二亚油酸-3-油酸甘油酯，1-棕榈酸-2-油酸-3-亚油酸甘油酯，1，2-二油酸-3-亚油酸甘油酯，1，2-二油酸-3-棕榈酸甘油酯，三油酸甘油。

2.2.4.2 重复性试验：将同一样品平行制备6次，进样分析，所得数据导入中药指纹图谱相似度评价软件中，各个色谱峰之间的相似度值都接近于1，以三油酸甘油酯色谱峰为参照峰，其相对峰面积的RSD＜2.65%，说明样品制备重复性良好。

2.2.4.3 精密度试验：将同一供试品溶液重复进样6次，所得数据导入中药指纹图谱相似度评价软件中，各个色谱峰之间的相似度值均在0.98以上，以三油酸甘油酯色谱峰为参照峰，其相对峰面积的RSD＜2.45%，说明精密度良好。

2.2.4.4 稳定性试验：将同一供试品溶液分别在0h，2、4、8、12、16、24 h 进样分析，将数据导入中药指纹图谱相似度评价软件中，各个色谱峰之间的相似度值均在0.98以上，以三油酸甘油酯色谱峰为参照峰，其相对峰面积的RSD＜2.92%，说明稳定性良好。

2.2.5 薏苡仁及其伪品指纹图谱分析 按“2.1.2”方法制备供试品溶液，并进行分析，由表2、图3可知，大麦、小麦、高粱米与薏苡仁的指纹图谱整体差异较大，相似度＜0.639，易于区分。薏苡仁与同属伪品草珠子相比，薏苡仁甘油三酯区段的色谱峰高低于草珠子；脂肪酸区段色谱峰峰形与草珠子有差异，同时34～36 min区段薏苡仁有两个明显的色谱峰，可用于区分薏苡仁与草珠子；在兼顾整体成分色谱峰的指纹图谱上，薏苡仁与草珠子的相似度小于0.920，可以准确区分。将谱图导入“2012版中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件”，计算的伪品与薏苡仁（Yyr-13）相似度如表2所示。

表2 薏苡仁（Yyr-13）与伪品药材的指纹图谱相似度值

3 讨 论

本研究优化了薄层色谱法并建立高效液相色谱指纹图谱法鉴别薏苡仁及其常见伪品。通过薄层色谱鉴别，可从薄层板上色谱条带的数目和明亮程度将大麦、小麦、高粱米与薏苡仁区分；然而草珠子与薏苡仁色谱条带辨识度较差，在难以区分的情况下，通过高效液相色谱指纹图谱可有效的鉴别。通过指纹图谱的对比，薏苡仁甘油三酯区段的色谱峰高低于草珠子；脂肪酸区段色谱峰峰形与草珠子有差异；同时34～36 min区段薏苡仁有两个明显的色谱峰，可作为区别草珠子的标志物。

高效液相色谱法运用常规流动相分离，具有安全、高效、易区分的特点，可高效地甄别薏苡仁伪品，确保真品质量。

图3 薏苡仁及其伪品指纹图谱比对