吴谢慧 赖铭裕 姜丹 张田宇 蒋丽萍 方子良 梁海秋

广西医科大学第一附属医院老年消化内科（南宁530021）

胃癌是全球最常见的消化道恶性肿瘤之一。据统计，我国2014年新发病例约40 万例，占世界总发病例数的42%［1］。因此，阐明胃癌的发病机制在胃癌预防、早期诊断及治疗策略中有着举足轻重的作用。

近年来研究表明长链非编码RNA（long nonprotein codingRNA，LncRNA）与多种肿瘤的发生、发展有关［2-4］。其中，HOTAIR 在多种肿瘤中有异常表达，并且其表达量与肿瘤的转移、进展及预后相关［5］，提示HOTAIR 可能成为肿瘤诊断有力的预测指标及治疗靶点。为了探讨HOTAIR 在胃癌发生发展中的关系，本研究通过对胃癌SGC-7901细胞进行转染，探讨HOTAIR 表达量对胃癌SGC-7901 细胞增殖凋亡的影响，并通过qRT-PCR 检测细胞的微小非编码RNA-126（microRNA 126，miR-126）表达量，探讨HOTAIR 影响胃癌发生发展的可能机制，为后续研究提供依据。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂 人胃癌SGC-7901 细胞株购于中国科学院细胞库；胰酶及胎牛血清（FBS）购自Gibco 公司；RPMI-1640 及DMEM 培养基购于Hy-Clone 公司；HOTAIR 过表达质粒、慢病毒与小干扰HOTAIR（si-HOTAIR）质粒由镇江爱必梦生物科技有限公司构建合成；CCK-8 试剂盒、Annexin VFITC 细胞凋亡检测试剂盒购自碧云天生物公司；LipofectamineTM2000 Transfection Reagent 试剂购自invitrogen 公司；慢病毒滴度检测试剂盒购自镇江爱必梦生物科技有限公司。

1.2 细胞培养及实验分组 将体外培养的人胃癌细胞株SGC-7901 分为：空白对照组即Blank 组（单纯的SGC7901 细胞株）；HOTAIR 过表达组（转染HOTAIR 过表达质粒）；si-HOTAIR 组：（转染si-HOTAIR 质粒）。培养条件：37 ℃，5%CO2恒温细胞培养箱，HOTAIR 过表达组培养基为RPMI +10%FBS+1%P/S+400 μg/mL G418，si-HOTAIR 组培养基为RPMI+10%FBS+1%P/S+0.2 μg/mL Puromycin，Blank 组培养基为RPMI+10%FBS+1%P/S。

1.3 细胞株构建

1.3.1 构建lncRNA-HOTAIR稳定过表达细胞株HOTAIR 过表达质粒信息为：pLenti-GIII-CMV-GFP-2A-Neo Vector。……