耿连婷 郑克彬 李春晖 张新婷 曾昭穆 张欣

1河北大学附属医院神经外科（河北保定071000）；2石家庄市第四医院医疗美容科（石家庄050000）；3河北大学医学院（河北保定071000）

胶质瘤是最常见的原发性颅内肿瘤［1］，其发病机制尚不明了［2］，手术和放化疗效果有时并不理想，目前基因治疗越来越受到重视。第10 号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源基因（phosohatase and tensin homolgue deleted on chromosome 10，PTEN）是重要的抑癌基因［3-4］，PTEN-Long 是PTEN的一种翻译变体［5］，与其具有相似的磷酸酶活性。PTEN-Long 还具有特殊的细胞分泌和穿透作用［5］，在基因治疗中增加了蛋白治疗的可能性，避免了免疫原性风险［6］。PTEN-Long 可抑制PI3KAKT 通路活性，此通路影响肿瘤增殖的多个关键步骤，核转录因子κB（nuclear factor kappa-B，NFκB）影响细胞存活及凋亡，其异常激活和恶性肿瘤的发生密切相关［7］，目前对PTEN-Long 影响下游NF-κB 的研究相对较少。本研究通过构建PTENLong 过表达模型，探讨PTEN-Long 对U251 细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡的影响及与PI3K-AKT-NF-κB信号通路的关系，为基因治疗提供依据。

1 材料与方法

1.1 材料 人胶质瘤细胞U251 购自国家实验细胞资源共享服务平台北京总部，PTEN-Long 过表达载体质粒构建和慢病毒包装由赛业公司完成。慢病毒表达载体包含了包装、转染、稳定整合所需要的遗传信息。质粒组成中包含目的基因hPTEN［NM_001304717.2］*/3xFLAG、EGFP：T2A：Puro 和氨苄西林抗性基因。表达载体和包装质粒共转染细胞，在细胞中进行病毒的包装，包装好的假病毒颗粒分泌到细胞外的培养基中，离心取得上清液后，可直接用于宿主细胞的感染，目的基因进入到宿主细胞后，经过反转录，整合到基因组，从而高水平的表达效应分子。……