严婷 叶艾竹 江恩利 王玉娟

(贵州省人民医院(1.妇科；(2.检验科，贵州 贵阳 550002)

上皮性卵巢癌(Epithelial Ovarian Cancer，EOC)作为女性生殖系统中致死率最高，预后差的一种恶性肿瘤[1]，其发生发展机制尚未完全阐明。我们此前的研究发现，GINS2基因在上皮性卵巢癌组织及细胞株中高表达。GINS2基因又称Psf2，是定位于16号染色体长臂上2区4带，全长1196bp，编码相对分子质量为21 000的蛋白质[2]。研究发现，GINS2在真核细胞中可以通过各种受体、生长因子和蛋白参与细胞周期的调控，并对细胞DNA的复制起始及增殖起到十分关键的作用[3]。GINS2在乳腺癌[4]、白血病[5]、肺癌[6]等恶性肿瘤组织中表达明显升高，提示GINS2在肿瘤的形成、增殖、转移中起重要作用。RNA干扰(RNA interference，RNAi)是由核苷酸的小分子干扰RNA(small interference RNA，siRNA)诱导细胞同源基因mRNA降解、引发靶mRNA 降解而导致基因表达沉默的过程。RNAi作用机制具有普遍性、特异性、高效性、位置效应等特点，已被广泛应用于基因功能研究[7]。本研究拟构建稳定干扰人GINS2基因的慢病毒载体，并检测其感染效率，为进一步研究GINS2在上皮性卵巢癌发生过程中的作用奠定基础，旨在探讨其作为靶向治疗的可能性。

1 材料与方法

1.1 材料及试剂 GV115慢病毒重组载体(hU6-MCS-CMV-EGFP)、慢病毒包装载体pHelper 1.0、pHelper2.0(上海吉凯基因化学技术有限公司，GeneChem)，293T细胞株(CBTCCCAS，Shanghai，China)，SKOV3细胞株(CBTCCCAS，Shanghai，China)，DMEM(Hyclone)、胎牛血清(上海微科生化试剂有限公司)，吉凯转染试剂(上海吉凯基因化学技术有限公司，GeneChem)、限制性内切酶(NEB)、T4DNA连接酶(Fermentas)、Taq酶(Vazyme)、质粒DNA提取试剂盒(TIANGEN)、SYBR Real-time PCR 试剂盒(Takara，Dalian，China)、鼠抗Flag抗体(Sigma)，鼠抗GAPDH抗体(Santa-Cruz Biotechnology)，羊抗鼠抗体(Sc-2005，Santa-Cruz Biotechnology)。

1.2 实验方法

1.2.1 GINS2 RNAi慢病毒表达载体的构建 根据GenBank 注册的GINS2(NM-016095)序列，根据RNAi序列设计原则，以GINS2基因为模板，设计多个19-21ntRNA干扰靶点序列。……