HPLC 法同时测定麝香保心丸中间体中7 种成分

2019-06-01朱诗竟李淞明詹常森

中成药 2019年4期

朱诗竟，李淞明，詹常森

（上海和黄药业有限公司，上海中药固体制剂创新工程技术研究中心，上海 201401）

麝香保心丸由人工麝香、人参、人工牛黄、肉桂、苏合香、蟾酥、冰片7 味药材组成，是在苏合香丸的基础上研制而成，功效芳香温通、益气强心，用于心肌缺血引起的心绞痛、胸闷、心肌梗塞，对各类型心绞痛均具有良好的治疗效果[1］。方中肉桂性辛、甘、热，归肾、脾、心、肝经，具有补火助阳、散寒止痛、温通经脉等作用，主要含有挥发油、二萜及其糖苷、黄烷醇及其多聚体，以及黄酮、多酚等成分，其中桂皮醛、肉桂酸含有量测定的报道较多[2-7］， 2015 年版《中国药典》[7］以前者为检测指标；蟾酥味甘、辛，性温，有毒，具有解毒、消肿、醒神、开窍、强心、止痛等作用，主要含有蟾蜍毒素、蟾毒配基、蟾毒色胺等成分[8-13］， 2015 年版《中国药典》[14］以华蟾酥毒基、酯蟾毒配基为检测指标。

日蟾毒他灵、蟾毒灵、华蟾酥毒基、肉桂酸为麝香保心丸入血成分；蟾毒他灵、酯蟾毒配基均为蟾酥活性成分群——蟾蜍甾二烯类，而且后者是药典规定的蟾酥含有量测定指标成分；香豆素为肉桂中活性成分。因此，本实验建立HPLC 法同时测定麝香保心丸中间体中上述7 种成分的含有量，以期为该制剂全面质量控制提供依据。

1 材料

1.1 仪器 Agilent 1260 Infinity 型高效液相色谱仪，配置四元梯度泵、二极管阵列检测器、控温柱温箱、自动进样器、 ChemStation 工作站（美国Agilent 公司）； XS205DU 电子分析天平（瑞士梅特勒-托利多公司）； SB-5200DTD 超声波仪（宁波新芝生物科技股份有限公司）。

1.2 试药肉桂酸（批号110786-200503）、蟾毒灵（批号111981-201503）、华蟾酥毒基（批号110803-201406）、酯蟾毒配基（批号 110718-201108）对照品均购自中国食品药品检定研究院；日蟾毒他灵（批号150809）、蟾毒他灵（批号150926）对照品均购自成都普菲德生物技术有限公司；香豆素（批号C4261-50G）对照品购自西格玛奥德里奇（上海）贸易有限公司。麝香保心丸中间体（上海和黄药业有限公司，批号20160605、20160606、 20160609）。乙腈为色谱纯（美国Fisher公司）；其他试剂均为分析纯；水为超纯水（美国Millipore 超纯水仪制备）。

2方法与结果

2.1 色谱条件 Agilent Zorbax SB-C18色谱柱（4.6 mm×250 mm， 5 μm）；流动相乙腈-0.1% 磷酸，梯度洗脱，程序见表1；柱温30 ℃；检测波长280 nm；进样量10 μL。

表1 梯度洗脱程序Tab.1 Gradient elution programs

2.2 溶液制备

2.2.1 对照品溶液精密称取各对照品适量，置于同一10 mL 量瓶中，甲醇定容至刻度，即得（日蟾毒他灵0.17 mg／mL、香豆素0.081 1 mg／mL、肉桂酸0.057 1 mg／mL、蟾毒他灵0.365 5 mg／mL、蟾毒灵0.351 5 mg／mL、华蟾酥毒基0.441 5 mg／mL、酯蟾毒配基0.415 5 mg／mL）。

2.2.2 供试品溶液取中间体适量，研磨后精密称取2 g，置于具塞三角烧瓶中，加入20 mL 甲醇，密塞，称定质量，超声30 min，放冷，甲醇补足减失的质量，上清液过0.22 μm 微孔滤膜，取续滤液，即得。

2.2.3 阴性样品溶液按照处方和制备工艺去掉肉桂、蟾酥、苏合香，将人工麝香、人参提取物、人工牛黄、冰片细粉混匀，作为阴性样品，按“2.2.2” 项下方法制备，即得。

2.3 方法学考察

2.3.1 系统适用性考察与专属性试验取对照品、供试品、阴性样品溶液，在“2.1” 项色谱条件下进样测定，结果见图1。由图可知，各成分色谱峰分离度均＞1.5，阴性无干扰，方法专属性良好。

2.3.2 线性关系考察将对照品溶液逐级稀释成系列质量浓度，在“2.1” 项色谱条件下进样测定。以峰面积为纵坐标（Y），质量浓度为横坐标（X）进行回归，结果见表2，可知各成分在各自范围内呈良好的线性关系。

2.3.3 精密度试验取“2.2.1” 项下对照品溶液，在“2.1” 项色谱条件下进样测定6 次，测得日蟾毒他灵、香豆素、肉桂酸、蟾毒他灵、蟾毒灵、华蟾酥毒基、酯蟾毒配基峰面积RSD 分别为0.12%、 0.17%、 0.24%、 0.21%、 0.19%、 0.18%、2.04%，表明仪器精密度良好。

图1 各成分HPLC 色谱图Fig.1 HPLC chromatograms of various constituents

表2 各成分线性关系Tab.2 Linear relationships of various constituents

2.3.4 稳定性试验取同一批中间体，按“2.2.2” 项下方法制备供试品溶液，于0、 2、 4、6、 8、 12 h 在“2.1” 项色谱条件下进样测定，测得日蟾毒他灵、香豆素、肉桂酸、蟾毒他灵、蟾毒灵、华蟾酥毒基、酯蟾毒配基峰面积RSD 分别为2.68%、 0.57%、 2.35%、 0.76%、 0.76%、 0.80%、2.75%，表明溶液在12 h 内稳定性良好。

2.3.5 重复性试验取同一批中间体，按“2.2.2” 项下方法平行制备6 份供试品溶液，在“2.1” 项色谱条件下进样测定，测得日蟾毒他灵、香豆素、肉桂酸、蟾毒他灵、蟾毒灵、华蟾酥毒基、酯蟾毒配基含有量RSD 分别为1.35%、1.11%、 2.30%、 1.19%、 1.39%、 1.13%、 0.73%，表明该方法重复性良好。

2.3.6 加样回收率试验精密称取各对照品适量，加到含有量已知的同一批中间体中，平行6 份，按“2.2.2” 项下方法制备供试品溶液，在“2.1” 项色谱条件下进样测定，计算回收率。结果，日蟾毒他灵、香豆素、肉桂酸、蟾毒他灵、蟾毒灵、华蟾酥毒基、酯蟾毒配基平均加样回收率分别为98.73%（RSD=1.56%）、 99.16% （RSD=0.93%）、 98.24%（RSD=1.64%）、 102.49% （RSD=1.27%）、 100.05%（RSD=1.86%）、 100.64% （RSD=2.12%）、 100.26%（RSD=2.87%）。

2.4 样品含有量测定取3 批中间体，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，在“2.1” 项色谱条件下进样测定，计算含有量，结果见表3。