尹曼曼，楼觉人

(上海海利生物技术股份有限公司/上海市兽用生物制品工程技术中心，上海 奉贤 201403)

兔病毒性出血症(Rabbit hemorrhagic disease，RHD)俗称“ 兔瘟”，是由 RHD 病毒(RHDV)引起的一种急性、败血性传染病，对养兔业造成重大危害，死亡率高达90 %以上[1]。1984年该病首次在中国发现，之后在世界范围内迅速蔓延[2]。

至今仍未有一种能够使RHDV 长期稳定传代的细胞[3]，因此目前用于预防和控制RHD 疫情的疫苗主要是组织灭活疫苗，该疫苗不仅成本高，且一旦强毒灭活不彻底，会进一步传播病毒[4]。RHDV 只有一个血清型，其核衣壳仅由一个60 ku 的主要结构蛋白VP60组成，各分离株VP60 基因高度保守，其核苷酸和氨基酸同源性均在90 %以上，VP60 在病毒诊断和疫苗设计方面发挥着重要的作用[5]。因此科研工作者相继开展对RHDV 基因工程苗的研制，相继在大肠杆菌、杆状病毒、痘病毒、酵母以及家蚕中表达了VP60 蛋白，表达的VP60 可以形成与天然RHDV 病毒粒子在物理形态上类似的不含病毒核酸的病毒样颗粒(VLP)，其能够诱导产生保护性免疫应答[5-8]。2017年2月江苏省农业科学院兔病学科团队研发的RHDV 杆状病毒载体灭活疫苗(BAC-VP60 株)获得国家新兽药一类注册证书，这是我国也是世界上第一个获得政府许可的针对兔瘟的亚单位疫苗[9]。严维巍等在毕赤酵母GS115 中表达了与天然 RHDV 结构相似的 VLPs，表达的重组蛋白可以凝集人“ O”型红细胞，该血凝性可以被抗RHDV 的高免血清所抑制[9]。但未验证毕赤酵母表达的VLP 对RHDV 的攻毒保护效果。

本研究利用毕赤酵母表达系统构建稳定高效表达的 VP60 重组菌，在酵母内表达 RHDV VLPs，形成的VLPs 结构更稳定和均一，表达量更高，并研究了其对实验兔的免疫保护性，为RHDV 亚单位疫苗的研发奠定基础。……