青鱼Dazl基因的原核表达及其多克隆抗体制备
2019-05-21王艺舟潘启华夏必琳罗君志廖明聪陈天圣
王艺舟,潘启华,王 乾,夏必琳,罗君志,方 健,邓 羽,廖明聪,陈天圣,2
(1.华中农业大学水产学院,农业部淡水生物繁育重点实验室,武汉 430070;2.水产高效健康生产湖南省协同创新中心,湖南常德 415000)
Dazl(Deleted in Azoospermia-like)基因是DAZ基因家族的一员[1-3],其编码RRM(RNA recognition motif)RNA结合蛋白,是动物生殖细胞中非常重要的翻译调控因子[4-5]。Dazl基因最早由Eberhart从蝇类睾丸组织中获得,是一个性腺特异性表达的基因[3]。在成体动物睾丸组织中,Dazl主要分布于精原细胞和初级精母细胞的细胞核中,而在粗线期精母细胞中则主要分布在细胞质中,这揭示了在减数分裂中Dazl完成了从精原细胞的细胞核向次级精母细胞的细胞质内迁移的过程[6]。Dazl表达的增加或下降显著影响生物体的发育和生殖[7],在非洲爪蟾(Xenopuslaevis)中XDazl基因的缺失会导致原始生殖细胞的形成受到阻碍[8];小鼠(Musmusculus)Dazl基因敲除后,发现雌性生殖细胞只能停滞在第一次减数分裂前期,而雄性生殖细胞在有丝分裂过程中就会受到影响,最终导致雌雄双方都无法产生成熟配子[9];在人类中,Dazl基因的缺失或突变会导致精子缺乏症和男性不育[6]。
Dazl基因在鱼类中的研究报道主要集中在斑马鱼(Daniorerio)[10]、青鳉(Oryziaslatipes)[11]、牙鲆(Paralichthysolivaceus)[12]、鲤鱼(Cyprinuscarpio)[13]、半滑舌鳎(Clariasgariepinus)[14]、亚洲鲈鱼(Asianseabass)[15]、中华鲟(Acipensersinensis)[16]等,其研究内容主要集中在RNA水平的表达和与原始生殖细胞的形成等关联,Dazl蛋白只在青鳉、鲤鱼、中华鲟等少数鱼类中有报道[11,13,16],但是鱼类Dazl抗原保守性不高导致抗体不能跨物种使用。我们聚焦于青鱼(Mylopharyngodonpiceus,Mp)的生殖细胞研究,青鱼是我国传统的“四大家鱼”之……
