王云慧 杨明

【摘 要】目的：探討血清MP-IgM检测与重症手足口病的关联性。方法：本研究以我院收治的75例重症手足口病合并MP感染患儿为研究对象，病程在1-2周内，采用ELISA法测定患儿血清中MP -IgM表达， 比较支原体快速培养法和血清中MP -IgM两种方式的诊断价值以及年龄、免疫状态、用药、入院时间对其诊断结果的影响。采用单因素及多因素Logistic回归分析重症手足口病合并肺炎支原体感染患儿血清 MP-IgM 测定阳性率的影响因素。结果：病程1-2周内MP-IgM法测定阳性率显著高于快速培养法（P<0.05）;MP-IgM法在年龄>3岁患儿中阳性检出率显著高于年龄≤3岁患儿（P<0.05），在免疫正常患儿中阳性检出率显著高于免疫异常患儿（P<0.05），用药与未用药中血清 MP-IgM 法阳性检出率显著高于快速培养法（P<0.05），在患儿入院1个月后阳性检出率显著高于患儿入院时（P<0.05）。 单因素及多因素Logistic回归分析结果显示，年龄、免疫状态、病程表达水平与重症手足口病合并肺炎支原体感染患儿血清 MP-IgM 测定阳性率显著相关（P<0.05）。结论：重症手足口病患儿在发生感染后1-2周内易由轻症转化为重症，血清MP-IgM检测在重症手足口病合并MP体感染患儿的早期诊断中具有较高的诊断价值，其诊断结果受患儿年龄、免疫状态、病程等因素影响，可根据诊断结果在疾病早期在抗病毒的基础上尽早加用阿奇霉素进行治疗，及时控制病情，防止轻型转化为重症，降低死亡率。

【关键词】肺炎支原体IgM抗体;重症手足口病;合并感染

Abstract：Objective To investigate the value of serum Mycoplasma pneumoniae IgM antibody detection in the early diagnosis and treatment of children with severe hand-foot-mouth disease complicated with Mycoplasma pneumoniae infection.

Methods：In this study， 75 children with severe hand-foot-mouth disease complicated with Mycoplasma pneumoniae infection in our hospital were studied. The expression of MP-IgM in serum was detected by ELISA， and the expression of MP in serum was detected by rapid culture of MP. The diagnostic value of the two methods was compared， and the influence of age， immune status， course of disease， medication and admission time on the diagnostic results was discussed. Univariate and multivariate Logistic regression analysis was used to determine the positive rate of serum MP-IgM in children with severe hand-foot-mouth disease complicated with mycoplasma pneumoniae infection. Results： The positive rate of MP-IgM method was significantly higher than that of rapid culture method （P<0.05）; the positive rate of MP-IgM method was significantly higher in children over 3 years old than that of children under 3 years old （P<0.05）， and was significantly higher in children with normal immunity than those with abnormal immunity （P<0.05）. There was no significant difference in the positive rate of the rapid culture method among the children with different immune status， different course of disease and different medication （P<0.05）. Logistic multivariate regression analysis showed that age， immune status， course of disease expression were significantly correlated with the positive rate of MP-IgM in serum of children with severe hand-foot-mouth disease complicated with Mycoplasma pneumoniae infection （P<0.05）.

Key words： severe hand foot mouth disease; mycoplasma pneumoniae IgM antibody; CO infection.

【中图分类号】R446.6【文献标识码】A【文章编号】1005-0019（2019）10-00-01

引言 手足口病（hand-foot-mouth disease， HFMD）是近年来威胁学龄前儿童健康的丙类传染病，5岁以下儿童（尤以3岁以下）发病率最高，肠道病毒EV-71型和柯萨奇病毒A-16、A6型最常见，潜伏期多为2～10天，平均3～5天[1，3]。其中肠道病毒EV-71型，早期为轻型，极短时间内迅速发展为脑膜脑炎、脑干脑炎、脑脊髓炎、肺水肿、肺出血、循环障碍等，大多会引起死亡，其致死原因为神经源性肺水肿、肺出血、脑干脑炎，其高发病率及死亡率引起社会极大关注。 HFMD病情加重与其合并其他病原体感染密切相关，虽然合并MP感染的报道较少，但我们在临床上发现HFMD合并MP感染的患儿却较为常见，高于同期呼吸道（upper respiratory tract infection，URTI）感染患儿，特别是重症手足口病更为常见，且病情比较重， 因此在临床上应重视HFMD合并MP感染，可及早在使用利巴韦林抗病毒的基础上加用阿奇霉素积极抗感染治疗，缩短病程、减轻症状，预防轻症转化为重症，降低重症死亡率。

近年来大量研究证实，重症手足口病患儿可能合并MP感染，根据病原学检查结果进行抗生素治疗，对此类患儿呼吸道感染病原菌的鉴定至关重要，然而仅仅依靠最初的临床表现无法对MP感染的发生进行早期诊断，为此应探寻新的、高效的实验室病原学检测方案。最近的研究表明，重症手足口病患儿在发生感染后1-2周内容易由轻症转化为重症，故而可使用分子方法或免疫检测集中于IgM抗體的病原体检测方法的选择。本研究以75例重症手足口病合并MP感染患儿为研究对象，旨在探讨ELISA法测定MP-IgM在其早期诊疗中的价值。

1资料与方法

1.1 一般资料 2014年4月—2017年8月，本研究选取我院感染科病房收治的75例重症手足口病合并MP感染患儿为研究对象。受试患儿平均年龄0至5岁，>3岁者49例，≤3岁者26例，病程1周内27例、1-2周内者48例。

1.1.1 入组标准 ①符合诊断标准的手足口病患儿，病程1周以内、1-2周内者。②患儿符合MP感染诊断标准;③符合上呼吸道感染诊断标准。④患儿无基础疾病或基础疾病轻微，患儿临床依从性好者;⑤患儿临床资料完整者。

1.1.2 排除标准 ①排除合并其他肺部疾病患儿;②排除社区获得性肺炎患儿;③排除合并恶性肿瘤患儿。

1.1.3 HFMD重症 年龄小于3岁，体温持续高热不退，大于39℃以上，精神差，嗜睡，频繁呕吐，呈喷射状，易惊，肢体抽搐，双手抖动，呼吸、心率快，全身出冷汗，四肢末梢循环凉，血压高，外周血白细胞计数明显增高，大于1.5万以上，高血糖[1，5]。

1.2 研究方法

1.2.1 酶联免疫吸附测定（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）法测定血清中MP-IgM 取受试者清晨空腹状态下， 取4mL肘静脉血，沿试管壁置于EDTA抗凝管中，放入在3000r/min的转速的冷冻离心机（德国，Sigma）离心10min，以分离血清，置于抗凝采血管中后在-80℃条件下保存待测。采用检测肺炎支原体IgM（SeroMPTM IgM）的ELISA试剂盒测定血清肺炎支原体IgM抗体表达情况，全部操作过程严格按照试剂盒说明书进行，ELISA试剂盒由以色列Savyon Diagnostics公司生产。

1.2.2 MP快速培养法测定 采用MP 快速培养基（郑州威可瑞生物科技有限公司）测定MP ，从冰箱取出所需培养基，融化后复温、标记，（标本采取同P8-9页1.2.2肺炎支原体快速培养），将采集的标本拭子在瓶壁内挤压旋转数次，使样本尽可能多的渗入;旋紧盖子，置35℃-37℃培养，在3h观察结果。培养基由红色变为橙色，进而变为透明黄色，判为MP阳性;培养基不变色可继续培养至4-6h，若培养基仍未变黄，判为MP阴性。

1.2.3 观察指标 （1）比较血清MP-IgM法、快速培养法两种测定方法的阳性率 。（2）比较MP-IgM法、快速培养法在年龄>3岁、年龄≤3岁患儿中的阳性检出率。（3）比较MP-IgM法、快速培养法在免疫正常、免疫异常患儿中的阳性检出率。注： CD4淋巴细胞计数为（200～499）×109/L者视为免疫异常，以全部淋巴细胞的百分比报告数据，并且修正门内淋巴细胞纯度。（4） 比较MP-IgM法、快速培养法在用药与不用药检出率。（5） 比较MP-IgM法、快速培养法在患儿入院时、入院1个月后的阳性检出率。（6）采用单因素及多因素Logisti回归分析患儿血清 MP-IgM 检测阳性率的影响因素。

1.2 统计学分析 采用SPSS19.0软件进行统计分析，计数资料比较采用卡方检验，P<0.05差异有统计学意义。

2结 果

2.1 血清MP-IgM法、快速培养法两种测定方法的阳性率：

75例重症手足口病合并MP感染，血清MP-IgM54例，快速培养法34例。血清MP-IgM法测定阳性率明显高于快速培养法，差异具有统计学意义（P<0.05），差异具有统计学意义（P<0.05）。

2.2 两种检测方式对不同年龄段患儿的检出情况比较

在年龄>3岁、年龄≤3岁的75例患儿中，MP-IgM法测定阳性率均明显高于快速培养法，差异具有统计学意义（P<0.05）;MP-IgM法、快速培养法在年龄>3岁患儿中阳性检出率明显高于年龄≤3岁患儿，差异具有统计学意义（P<0.05）。

2.3 两组检测方式对不同免疫状态患儿的检出情况比较

在免疫正常、免疫异常的75例患儿中，病程1-2周者MP-IgM法测定阳性率均明显高于快速培养法，差异具有统计学意义（P<0.05）;MP-IgM法在免疫正常患儿中阳性检出率明显高于免疫异常患儿，差异具有统计学意义（P<0.05）;快速培养法在不同免疫状态患儿中阳性检出率无显著差异（P>0.05）。

2.4 两组检测方式对不同用药情况患儿的检出情况比较

在用药、未用药的75例患儿中，MP-IgM法测定阳性率均明显高于快速培养法，差异具有统计学意义（P<0.05）;MP-IgM法、快速培养法在不同用药情况患儿中阳性检出率无显著差异（P>0.05）。

2.5 兩组检测方式动态检测患儿的检出情况比较

75例患儿入院时、入院1个月，MP-IgM法测定阳性率均明显高于快速培养法，差异具有统计学意义（P<0.05）;MP-IgM法、快速培养法在患儿入院1个月后阳性检出率明显高于患儿入院时，差异具有统计学意义（P<0.05）。

2.6 影响血清 MP-IgM 测定阳性率的单因素回归分析

将患者血清 MP-IgM 测定阳性率当作因变量，将PSI评分、APACHII评分、治疗方案、ICU时间、机械通气、检测方式、年龄（>3岁）、免疫状态、病程作为自变量进行Logistic回归分析，结果提示 年龄、免疫状态、病程与重症手足口病合并肺炎支原体感染患儿血清 MP-IgM 测定阳性率显著相关（P<0.05）。

Logistic单因素回归分析结果显示，年龄、免疫状态、病程与重症手足口病合并肺炎支原体感染患儿血清 MP-IgM 测定阳性率显著相关，且其相关密切程度依次为免疫状态、病程和年龄。

3结 论

75例重症手足口病合并MP感染患儿为研究对象，采用ELISA法测定患儿血清中MP -IgM表达， 快速培养法测定痰液分泌物中MP表达，比较两种方式的诊断价值以及年龄、免疫状态、 用药、入院时间对其诊断结果的影响。采用Logistic多因素回归分析重症手足口病合并肺炎支原体感染患儿血清 MP-IgM 测定阳性率的影响因素。本研究发现，MP-IgM法测定阳性率均显著高于快速培养法（P<0.05）;MP-IgM法在年龄>3岁患儿中阳性检出率显著高于年龄≤3岁患儿（P<0.05），在免疫正常患儿中阳性检出率显著高于免疫异常患儿（P<0.05），在用药、在患儿入院1个月后阳性检出率显著高于患儿入院时（P<0.05）。快速培养法在不同年龄、免疫状态、不同用药等情况患儿中阳性检出率无显著差异（P>0.05）。Logistic多因素回归分析结果显示，年龄、免疫状态、病程表达水平与重症手足口病合并肺炎支原体感染患儿血清 MP-IgM 测定阳性率显著相关（P<0.05）。综上所述，血清MP-IgM检测在重症手足口病合并肺炎支原体感染患儿的早期诊断中具有较高的诊断价值，其诊断结果受患儿年龄、免疫状态以及病程的影响，可根据就诊时间在疾病早期采取相应检测方式，为MPP或者重症手足口病合并MP后及早采用阿奇霉素积极治疗，避免轻症转化为重症，降低死亡率。

4讨 论

手足口病为一种自限性的发热性疾病，伴有不适、口腔溃疡、咽喉或口腔疼痛，以及手和脚上的水泡性皮疹。这种疾病起因于发烧、不适、食欲不振和喉咙痛[8，9]。此期易误诊为上呼吸道感染，发烧通常为低度发热，在48小时内消退。发烧后1-2天内口腔开始出现疼痛性病变，通常位于舌、腭和颊粘膜。红斑性口腔斑疹演变成囊泡，破裂并引起疼痛性溃疡。患者因为明显的不适拒绝吃喝，可能会出现脱水。皮疹最常见于手掌和脚底，臀部和生殖器部位。皮肤病变通常为囊泡，伴有周围红斑，但也可表现为小红斑性黄斑、丘疹、聚集性囊泡，甚至大疱[10-12]。MP是一类很小的病原菌，它是一种引起病原体肺炎支原体肺炎的病原体。MP仅寄生于人的呼吸道上皮并可能感染所有年龄的人，其中儿童最易受影响。MP是小儿社区获得性肺炎最重要的病原体之一，约占儿科CAP病例的10%-40%。MP感染在我国人群中非常常见，大约18%的MP感染儿童需要住院治疗，但其临床特征和实验室参数尚不清楚和特异性[13]。本研究与相关研究结论一致[14，15]，部分重症手足口病患儿可能发生MP感染，而在发生MP感染后其对经常用于治疗小儿肺炎的β-内酰胺类抗生素不敏感，MP感染后若未及时得到有效的治疗，可能影响患儿生长发育、甚至危及患儿生命。

MP感染的实验室诊断在临床上一直以血清学、培养以及聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）为基础，然而它们各有特定的局限性[16，17]。由于MP缺乏细胞壁，因此不受青霉素类和其他β-内酰胺类抗生素的影响。实验室病原学检测逐渐变得非常重要，以便为MP感染提供合适的抗生素治疗。目前，一些实验室病原学检测被用于检测MP感染，包括培养和分离、血清学和基于分子的检测。培养和分离是准确的，但相对不敏感和耗时，需要长达3周。目前，血清学和PCR是检测MP的两种主要实验室诊断方法。血清学检查是诊断MP感染的最常用方法，但受交叉反应甚至非特异性反应的限制。培养试验是检测MiP感染的重要标准，但由于特殊培养基、实验室条件和技术人员的要求，很少被用作诊断工具。在有配对血清的情况下，当配对血清中MP-特异性免疫球蛋白（Ig）G滴度增加至少四倍时，MP感染可被确诊，然而，这种方法不能用于早期诊断。PCR，特别是实时聚合酶链反应（Real-time PCR，RT-PCR）由于具有省时、高灵敏度、高特异性等优点，已被广泛应用于临床MP的检测。尽管PCR检测MP快速、有效，但由于MP存在于0.1%-13.5%的健康个体中，因此不能区分MP携带者和MP感染。此外，MP DNA在初次感染后7周至7个月内可能存在于上呼吸道，导致PCR检测结果假阳性。尽管近年来诊断分析取得了进展，但是缺乏标准化、灵敏和特异的MP检测方法，极大地阻碍了实验室诊断，因此探寻一种特异性的诊断工具极其重要[18-20]。

目前，MP-IgM水平升高是MP感染临床诊断的主要实验室依据。ELISA由于成本低、敏感性和特异性高，是目前最常用的MP检测方法。本研究采用ELISA法测定血清中MP-IgM以及MP 快速培养法测定血清中MP两种方式对重症手足口病患儿合并MP感染情况进行了测定，发现MP-IgM法在年龄>3岁、免疫正常、病程>7-14d患儿以及患儿入院1个月后的阳性检出率较高，而在年龄≤3岁、免疫异常、病程≤7d患儿以及患儿刚入院时的阳性检出率较低，且Logistic多因素回归分析结果显示，年龄、免疫状态、病程表达水平与重症手足口病合并肺炎支原体感染患儿血清 MP-IgM阳性率检出率的独立影像因素（P<0.05），提示在选择检测方式时还应结合患儿的个人实际情况。

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