张红霞，任春娥，王晓静，张勇，王桂丽△

子宫内膜异位症（endometriosis，EMT）是常见的妇科疾病，是指具有生长功能的子宫内膜组织（腺体和间质）出现在子宫体以外的部位，多见于生育期女性，可以引起患者下腹痛和痛经、性交不适、月经异常及不孕等。子宫内膜异位症的发生发展是机体内外环境因素作用下一个复杂、多因素、多步骤的病理生理过程。目前子宫内膜异位症的发病机制仍不清楚，近年来免疫炎症因素成为子宫内膜异位症发病机制的研究热点。SIRT1、SIRT2是沉默信息调节蛋白（Sirtuins）家族中重要的成员，Sirtuins 是一类依赖于烟酰胺腺嘌呤二核苷酸NAD+的蛋白去乙酰化酶，在细胞的炎症反应、DNA 修复、代谢、凋亡、增殖等生理活动中发挥着十分重要的调节作用［1］。IL-37可直接抑制促炎细胞因子的产生，具有抗炎作用［2］。本文通过观察SIRT1、SIRT2 及IL-37 在正常子宫内膜组织及子宫内膜异位症患者异位内膜组织中的表达差异，旨在探讨子宫内膜异位症患者可能的发病机制。

1 对象与方法

1.1 研究对象 收集2016年12月—2017年12月潍坊医学院附属医院妇科30例正常子宫内膜组织及30例子宫内膜异位症患者的异位内膜组织。正常子宫内膜组织在宫腔镜检查或子宫手术时获取，异位内膜组织为行卵巢巧克力囊肿剥除术时获取。所有患者的内膜组织均经病理检查确诊。年龄25～40岁。患者月经周期规律，无其他合并症及并发症，无妇科内分泌疾病、生殖道炎症，宫腔内未放置宫内节育器，非妊娠期或哺乳期。本研究经医院伦理委员会批准，患者均知情并签署知情同意书。

1.2 方法

1.2.1 主要试剂 兔抗人SIRT1（bs-0921R）、SIRT2（bs-7350R）、IL-37（bs-8811R）均购自北京博奥森生物技术有限公司，SP法免疫组化试剂盒、DAB底物显色剂、EDTA抗原修复液均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。

1.2.2 检测方法 免疫组化法检测SIRT1、SIRT2和IL-37表达。取非内异症患者正常子宫内膜组织及异位症患者异位内膜组织，经生理盐水冲洗后放入4%甲醛溶液中固定24 h，常规脱水和石蜡包埋。切片、烤片，然后用二甲苯脱蜡2遍，梯度乙醇水化，然后用3%H2O2室温浸泡20 min 阻断内源性过氧化物酶，再进行抗原修复，分别滴加稀释的一抗（1∶200），37 ℃孵育2 h 后，滴加二抗，37 ℃孵育30 min。DAB 显色：使用DAB显色试剂盒，1 mL蒸馏水加显色剂一滴，混匀，加至标本上，显色3 min，自来水充分冲洗；苏木素复染1 min，自来水冲洗返蓝3 min，梯度乙醇脱水，再放入二甲苯中浸泡2遍，中性树脂封片。光镜下观察组织形态，以已知阳性切片作为阳性对照，PBS代替一抗作阴性对照。筛选组织标本并将正常内膜及异位内膜按病理结果分为增殖期和分泌期。

1.2.3 阳性判断标准 细胞质或细胞核染为棕黄色为阳性细胞。每张切片在高倍镜下（×200倍）随机选取3个视野，每个高倍视野均计数100个细胞，计算各视野中阳性细胞数的平均百分数进行评分：≤1%计0 分，1%～10%计1 分，11%～50%计2 分，51%～75%计3 分，＞76%计4 分。根据染色强度评分，以多数阳性细胞呈现的染色特征为标准：细胞未着色计0分，淡黄色计1分，黄色或棕黄色计2分，棕黄色或棕褐色计3分。染色强度需与背景相对比，将两者得分相乘，0～3分为阴性（－）表达，4～12分为阳性（+）表达［3］。

1.3 统计学方法 采用SPSS 19.0 对数据进行分析，计数资料以例（%）表示，组间比较采用χ2检验或Fisher确切概率法，P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 正常子宫内膜组织及异位内膜组织中SIRT1、SIRT2 及IL-37 蛋白的表达 SIRT1、SIRT2 及IL-37主要分布在内膜腺上皮细胞胞质中（图1），正常子宫内膜组织SIRT1、SIRT2、IL-37阳性表达率分别为90%、86.7%、86.7%，而在子宫内膜异位症患者异位内膜中SIRT1、SIRT2、IL-37 阳性表达率分别为33%、20%、36.7%，差异有统计学意义（P＜0.05），见表1。

2.2 不同月经周期正常子宫内膜组织及异位内膜组织SIRT1、SIRT2 及IL-37 表达情况 将正常内膜组织及异位内膜组织根据形态分为增殖期与分泌期，其中正常内膜组织增殖期12例、分泌期18例，异位内膜组织增殖期16例、分泌期14例。正常内膜和异位内膜不同月经周期SIRT1、SIRT2 及IL-37 阳性表达率差异均无统计学意义（P＞0.05），见表2。同一月经周期异位内膜组织SIRT1、SIRT2 及IL-37 蛋白表达阳性率均低于正常内膜组织，见表3。

Tab.2 Expressions of SIRT1,SIRT2 and IL-37 in normal and ectopic endometrial tissues during proliferative and secretory phases表2 SIRT1、SIRT2及IL-37在正常内膜组织及异位内膜组织增殖期和分泌期的表达 例（%）

3 讨论

子宫内膜异位症在形态学上呈良性表现，但在临床行为学上具有类似恶性肿瘤的特点，如种植、侵袭及远处转移等，其发生包括黏附、侵袭和血管生成3 个环节。炎性反应在子宫内膜异位症的发生、发展中起着重要作用，可以减少细胞凋亡，增强异位内膜的黏附、侵袭及血管生成能力［4］。

Fig.1 Immunohistochemical staining of SIRT1,SIRT2 and IL-37 in different endometrial tissues(SP,×200)图1 不同子宫内膜组织中SIRT1、SIRT2和IL-37的免疫组织化学染色结果（SP，×200）

3.1 SIRT1、SIRT2与子宫内膜异位症的关系 本研究显示，子宫内膜异位症患者异位内膜组织中SIRT1、SIRT2表达水平较正常子宫内膜组织均显著降低。关于SIRT2 在子宫内膜中的作用，尚未有研究报道。Taguchi 等［5］研究发现白藜芦醇可以激活SIRT1，即使在肿瘤坏死因子（TNF）-α 刺激下，也能显著抑制异位子宫内膜组织细胞IL-8 的释放，而Sirtinol（SIRT1 抑制剂）对SIRT1 的抑制作用可促进异位子宫内膜组织细胞分泌IL-8，说明SIRT1 的激活在调节炎症细胞因子的表达中起着重要的作用，白藜芦醇有可能通过内源性SIRT1的激活来抑制炎症反应，与本研究中SIRT1 在异位子宫内膜组织低表达结果相符。

Tab.3 Expressions of SIRT1,SIRT2 and IL-37 in normal endometrium and ectopic endometrium during proliferative and secretory phases表3 SIRT1、SIRT2及IL-37在正常子宫内膜组织和异位内膜组织增殖期及分泌期的表达 例（%）

3.2 IL-37与子宫内膜异位症的关系 Jiang等［6］研究表明，IL-37在正常在位子宫内膜组织和异位症患者子宫内膜组织中均有表达，而在子宫腺肌病患者在位子宫内膜和异位子宫内膜中，IL-37的mRNA和蛋白表达水平较低，另外IL-1β、IL-18、TNF-α、干扰素（IFN）-γ 和转化生长因子（TGF）-β 均能促进IL-37的合成。另有研究表明，子宫内膜异位症患者血清和腹腔液中IL-37水平明显高于无子宫内膜异位症妇女，IL-37 mRNA 与NF-κB mRNA 表达呈显著负相关，子宫内膜异位症患者血清IL-37 水平升高可能会抑制NF-κB 的活化［7］。给予EMT 小鼠肌肉注射重组人IL-37（rhIL-37）后，发现rhIL-37可降低子宫内膜异位症样病变的大小和质量，降低IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α、血管内皮生长因子（VEGF）、可溶性细胞间黏附分子-I（ICAM-I）的表达，推测IL-37 通过多种信号途径抑制细胞的增殖、黏附、迁移和侵袭，从而影响子宫内膜异位症的发生和发展［2］。本研究中抗炎细胞因子IL-37在子宫内膜异位症患者异位内膜组织中表达水平低于正常子宫内膜组织，与上述结果相一致。

综上所述，本研究显示SIRT1、SIRT2及IL-37在子宫内膜异位症患者异位内膜组织中低表达，推测SITR1、SIRT2 激活及IL-37 可通过抑制炎症反应抑制异位子宫内膜的侵袭和转移。