宁静，郭红玉，陆阿飞

(1.青海省草原总站，青海 西宁 810008； 2.韩城市畜牧推广中心，陕西 韩城 715400)

龙胆属(Gentiana)植物大多为一年生或多年生草本植物，全世界有500种左右，广泛分布于温带地区和热带高山上，我国有230 种以上，主要分布在西南部，其中大部分供观赏用，有些可入药，龙胆属植物有泻肝胆实火、治肝炎、脑膜炎、胃炎、气管炎、祛风湿、褪虚热、舒筋止痛等功效[1-2]。

青海是我国龙胆属植物主产地之一，其中地道中药材秦艽历史悠久。青海分布的龙胆属植物绝大部分被当地中、藏、蒙医广泛使用[3]。因此，对这类植物的化学成分、药理以及构效关系展开深入的研究，将是民族药物开发研究中一个重大的环节。龙胆在《神农本草经》中作为中品收载，具有泻肝胆实火、清热燥湿的功效，用于骨寒热、湿热黄疸、寒湿脚气、咽喉痛、目赤、口苦等病症。现代药理研究证明，龙胆苦苷具有显著的肝脏保护、抗炎、抗病原微生物、中枢兴奋及健胃利胆等作用[4]。

对龙胆草类的研究，目前在国内还只是一个开端，仅有云南部分研究机构作了少量研究。本研究通过对华丽龙胆主要次生代谢物质和营养成分的测定，初步了解它的主要次生代谢物质和营养成分的含量，并对其进行分析，为以后龙胆草的开发利用提供有效的参考价值。

1 材料与方法

1.1 采样地点概况

本研究主要是针对青藏高原华丽龙胆化学成分的分析，选择在黄南州河南县启龙牧场样地采集。河南县启龙牧场位于黄南地区青海省东南部，东临甘肃夏河、碌曲，西南部和青海省玛沁县、同德县毗邻，被誉为青海省“南大门”。全县总面积6997.45km2，海拔3600m。河南县地势的总体趋势是西南低、东北高，最高海拔4539m，最低海拔3168m。

1.2 测定方法

1.2.1取样方法

于2015年7月—2016年5月进行本次试验，由于龙胆科植物喜温凉湿润气候、酸性土壤，在我国主要分布于青海、西藏等地的高山和亚高山地区。青海省地处青藏高原，华丽龙胆是较为常见的伴生种。因而华丽龙胆的自然聚集量是较为可观的,这无疑方便了研究。此次室外试验样地设在青海省黄南藏族自治州河南县启龙牧场，采集到华丽龙胆草样后进行室内阴干，并带回青海大学216实验室进行室内实验，将草样放入烘箱48h在105℃高温下烘干，用粉碎机将华丽龙胆粉碎成末状，放入自封袋中，并将其放入冰箱冷藏，以保证其成分不会损失。

1.2.2粗蛋白测定

(1)分别取1.0000g(误差为±0.0002g)华丽龙胆的3个草样粉末，采用凯式定氮法测定[5]。

(2)样品中粗蛋白质量分数计算:

ω=[(V1-V2)×C×0.014×6.25]/[m×(V’/V)]

C——盐酸标准滴定溶液浓度mol/L；

m——为样品质量g；

V1——为滴定样品时所需盐酸标准滴定溶液体积mL；

V2——为空白滴定所需盐酸标准滴定溶液体积mL；

V——为样品分解液总体积mL；

V’——为样品分解液蒸馏用体积mL。

0.014为1.00 mL 0.001mol/L盐酸标准滴定溶液相当的、以g表示的氮的质量；

6.25是氮换算成蛋白质的平均系数。

1.2.3粗纤维测定

(1)分别取1.0000g(误差为±0.0002g)的华丽龙胆地上、地下部位各3个草样粉末，采用酸碱消煮法。

(2)样品中粗纤维质量分数的计算：

ω(CF)=(m1-m2)/m

m——为样品质量g；

m1——为(130±2)℃烘干后坩埚及样品残渣质量g；

m2——为(500±25)℃灼烧后坩埚及样品残灰质量g。

1.2.4可溶性糖测定

(1)分别取0.2000g(误差为±0.0002g)的华丽龙胆的3个草样粉末，采用苯酚-硫酸法测定[6]。

(2) 标准曲线和求出的回归方程：吸光度的值Y是纵坐标、葡萄糖的含量X是横坐标，标准曲线见图1。

图1 葡萄糖的标准曲线

溶液吸光度的值Y与葡萄糖的含量X之间得到的回归方程：Y=0.0085X+0.0165，R2=0.999，说明标准品在0～101μg之间线性关系较好。

(3) 样品中可溶性糖含量计算:

可溶性糖的含量=(C×V1)/(V2×m×106)×100%

C——回归方程求得的葡萄糖含量μg；

V1——提取液定容体积mL；

V2——吸取样品液体积mL；

m——称取样品的质量g。

1.2.5总多酚成分测定

(1)分别取0.2000g(误差为±0.0002g)的华丽龙胆地上、地下部位各3个草样粉末，采用Folin-Ciocalteu比色法测定[7]。

校准曲线的建立：总多酚的浓度X为横坐标轴， 吸光度的值Y为纵坐标轴。标准曲线的回归方程: Y=109.89X+0.04659，Y为吸光度的值，X为总多酚的含量。

(2)计算公式：

Y=0.04659+109.89X

式中： Y为吸光度的值；X为总多酚的含量。

1.2.6总生物碱成分测定

(1)分别取0.5000g(误差为±0.0002g)的华丽龙胆地上、地下部位各3个草样粉末，采用分光光度法测定[8]。

(2) 标准曲线和求出的回归方程：生物碱的含量为横坐标轴，吸光度的值为纵坐标轴，得出回归方程，见图2。

图2 氯仿的波长扫描图

标准曲线的回归方程：Y=0.0393X-0.0138 ，R2=0.9991。

(3)计算公式：

Y=0.0393X-0.0138

式中：Y为吸光度的值；X为生物碱的含量。

1.2.7数据分析方法

为了研究方便，将华丽龙胆草样的粗蛋白含量、粗纤维含量、可溶性糖含量、总多酚含量输入并保存在EXCEL软件中，然后用SPSS软件进行数据处理。

2 结果与分析

2.1 华丽龙胆化学成分的测定

本次试验采用华丽龙胆草整株草样，为了使试验数据更加精确，每组试验均采取3个重复，试验结果见表1。华丽龙胆粗纤维含量为(69.30±2.00)mg/g，粗蛋白含量为(28.00±2.40)mg/g，可溶性糖含量为(61.60±8.0)mg/g，总多酚含量(4.0±1.0)mg/g，生物碱含量为(15.28±0.64)mg/g。

表1 华丽龙胆整株植物的化学成分 mg/g

注：此次试验中存在着一定的误差，如草样搁置时间较长、保存的过程中营养成分有一定的损失，其次在操作中也存在一定误差，若要尽可能减少误差，应增加实验次数和采用严谨的操作方法

2.2 华丽龙胆与蓬子菜、木地肤、藜 3 种植物的粗蛋白含量比较

华丽龙胆草粗蛋白含量为(28.00±2.40)mg/g，根据相关文献[9]，蓬子菜、木地肤、藜3种植物叶片粗蛋白含量分别为4.0mg/g、5.8mg/g、10.6mg/g，可见华丽龙胆的粗蛋白含量高于这3 种植物。因此在畜牧利用上，华丽龙胆起着一定的作用，有开发利用的价值。见表2。

表2 华丽龙胆与蓬子菜、木地肤、藜3种植物的粗蛋白含量比较 mg/g

2.3 华丽龙胆与柳蒿、荠菜、蒲公英、小根蒜4种山野菜植物的粗纤维含量比较

华丽龙胆草粗纤维含量为(69.30±2.00)mg/g，根据相关文献[10]，柳蒿、荠菜、蒲公英、小根蒜4种山野菜粗纤维含量分别为 96.7mg/g、83.0mg/g、75.0mg/g、24.5mg/g。可见华丽龙胆与其他植物相比，粗纤维含量差别不大，粗纤维一定程度上可以帮助消化，是有益处的，但粗纤维也能够阻碍消化道内的消化酶与食糜接触从而降低养分的消化率，此外粗纤维还能阻碍肠道对一些小分子养分的吸收[11]。见表3。

2.4 华丽龙胆与甘巴草、石芒草、青香茅3种植物的可溶性糖含量比较

华丽龙胆的可溶性糖含量为(61.60±8.00)mg/g。依据文献[12]将华丽龙胆与可溶性糖含量为(6.22±0.05)mg/g的甘巴草、(7.35±0.1)mg/g的石芒草、(32.91±0.11)mg/g的青香茅比较，可见华丽龙胆草的可溶性糖含量远高于其他3种植物。可溶性糖是植物的光合产物，也是碳水化合物代谢和短暂贮藏的主要形式，对高等植物营养生长、发育及生殖有重要影响。在干旱胁迫条件下，可溶性糖参与渗透调节和复水后的生理恢复，可溶性糖以类似激素的形式在植物生长、发育、成熟和衰老等过程中发挥调控作用。可溶性糖含量直接影响饲料干物质的进食量。因此，华丽龙胆在其可溶性糖方面，有一定的开发利用价值。见表4。

表4 华丽龙胆与甘巴草、石芒草、青香茅3种植物的可溶性糖的含量比较 mg/g

2.5 华丽龙胆与金露梅、珠芽蓼、秦艽3种植物的总多酚含量比较

华丽龙胆草的总多酚含量为(4.00±1.00)mg/g。根据文献[13]与总酚含量为81.00mg/g的金露梅、160.00mg/g的珠芽蓼、9.80mg/g的秦艽3种植物的总多酚含量进行对比。明显看出华丽龙胆的总多酚含量较低。酚是一类作用很强的自由基清除剂，酚的羟基具有强的供电子能力，能以单电子转移的方式清除氧自由基、多种活性氧或减少氧自由基产生的可能性，同时也能打断自由基氧化的链反应。在植物多酚的应用及其相关领域，多酚含量的多寡直接影响着其功能与作用。因此没有较大的开发意义。见表5。

表5 华丽龙胆与秦艽、金露梅、珠芽蓼3种植物的总多酚含量比较 mg/g

2.6 华丽龙胆与报春石斛、玫瑰石斛、束花石斛 3 种植物的生物碱含量比较

华丽龙胆草的生物碱含量为(15.28±0.64)mg/g。依据文献[14]与生物碱含量为6.38mg/g的报春石斛、5.00mg/g的玫瑰石斛、3.37mg/g的束花石斛3种石斛属植物进行比较，得出华丽龙胆的生物碱含量相当高。而生物碱是天然的含氮有机化合物，但不包括氨基酸、蛋白质、核苷、叶啉、胆碱甲胺等开链的简单脂肪胺，有显著的生物活性，是中草药中重要的有效成分之一。所以其具有一定的药用价值，值得开发利用。见表6。

表6 华丽龙胆与报春石斛，玫瑰石斛，束花石斛3种植物的生物碱含量比较 mg/g

3 讨论

目前，关于华丽龙胆草的研究很少，此次试验对华丽龙胆的化学成分进行了测定，采用相应的试验方法分别对华丽龙胆草的粗纤维、粗蛋白、总多酚、可溶性糖、生物碱物质成分进行测定，试验得出华丽龙胆粗纤维含量为(69.30±2.00)mg/g、粗蛋白含量为(28.00±2.40)mg/g、可溶性糖含量为(61.60±8.0)mg/g、总多酚含量(4.0±1.0)mg/g、生物碱含量为(15.28±0.64)mg/g。

与蓬子菜、木地肤、藜等植物相比，华丽龙胆的粗蛋白含量最高。因此在畜牧利用上，华丽龙胆起着一定的作用，有开发利用的价值。与蒲公英、荠菜、柳蒿、小根蒜等植物相比，小根蒜粗纤维含量最低，华丽龙胆次之，粗纤维可以一定程度上帮助消化，是有益处的。但华丽龙胆中的粗纤维能够阻碍消化道内的消化酶与食糜接触从而降低养分的消化率，此外华丽龙胆中的粗纤维还能阻碍肠道对一些小分子养分物质的吸收。与青香茅、甘巴草、石芒草等植物相比，华丽龙胆的可溶性糖含量最高。可溶性糖是植物的光合产物，也是碳水化合物代谢和短暂贮藏的主要形式。华丽龙胆对高等植物营养生长、发育及生殖有重要影响。与秦艽、金露梅、珠芽蓼等植物相比，华丽龙胆的总多酚含量最低。在植物多酚的应用及其相关领域，多酚含量的多寡直接影响着其功能与作用。与报春石斛、玫瑰石斛、束花石斛等植物相比，华丽龙胆的生物碱含量最高。而生物碱是天然的含氮有机化合物，但不包括氨基酸、蛋白质、核苷、叶啉、胆碱甲胺等开链的简单脂肪胺。生物碱有显著的生物活性，是中草药中重要的有效成分之一。

华丽龙胆在民间应用极为广泛。该属植物药理活性多样，化学成分复杂，并且随着化学成分研究的不断深入，发现了很多新的活性。龙胆属植物的药用成分主要是环烯醚萜类、黄酮类(属于总酚)、生物碱类、三萜类和其他化合物。其主要作用为泻肝胆实火、除下焦湿热。