陈博 孙晓岩 韩临晓 李青洋 赵丽 蔡昭炜 陈雪梅

【摘要】 目的：比较延时摄像胚胎观测技术（time-lapse）培养和常规体外受精（IVF-ET）胚胎培养对临床结局的影响。方法：回顾性分析2016年8月-2017年5月58例time-lapse培养周期和125例常规IVF胚胎培养周期的临床结果。比较time-lapse培养周期和常规IVF胚胎培养周期的卵裂数、D3优质胚胎数、D3可用胚胎数、种植率、临床妊娠率。结果：time-lapse培养周期组和常规IVF胚胎培养周期组的卵裂数、D3优质胚胎数、D3可用胚胎数、多胎率、种植率、累计移植次数和累计妊娠率比较差异均无统计学意義（P>0.05），两组临床妊娠率（62.5% vs 41.0%）比较差异有统计学意义（P<0.05）。结论：延时摄像胚胎观测技术（time-lapse）有助于预测胚胎发育潜能，可以改善胚胎选择方法，对传统的胚胎挑选给予新的思路。

【关键词】 时差成像技术 胚胎培养 胚胎评估

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2019.30.080 文献标识码 B 文章编号 1674-6805（2019）30-0-03

[Abstract] Objective： To compare the clinical outcomes of time-lapse embryo observation （time-lapse） and conventional in vitro fertilization （IVF-ET） embryo cultures. Method： The clinical results of 58 time-lapse cycles and 125 conventional IVF embryo culture cycles from August 2016 to May 2017 were analyzed retrospectively. The number of cleavage， number of high-quality embryos （D3）， number of available embryos （D3）， implantation rate and clinical pregnancy rate were compared between time-lapse lapse culture cycle and conventional IVF embryo culture cycle. Result： There was no significant difference in the number of cleavage， number of high-quality D3 embryos， number of available D3 embryos， multiple embryo rate， implantation rate， cumulative transfer times and cumulative pregnancy rate between the time-lapse cycle group and the conventional IVF cycle group （P>0.05）， The clinical pregnancy rate （62.5% vs 41.0%） was statistically different between the two groups （P<0.05）. Conclusion： Time-lapse imaging （time-lapse） can be used to predict the development potential of embryos， improve the method of embryo selection， and give new ideas on the selection of conventional embryos.

[Key words] Time-lapse imaging technique Embryo culture Embryo assessment

First-authors address： The Third Peoples Hospital of Dongguan City， Dongguan 523326， China

在体外受精-胚胎移植（IVF-ET）过程中，胚胎的发育潜能是影响临床结果的重要因素[1]。因此，如何正确判断和选择具有良好发育潜能的胚胎，保证较好的临床妊娠结局已成为胚胎学研究的焦点[2-3]。延时摄像技术（time-lapse，TLI）是一种瞬时曝光连续拍摄的成像技术[4-6]，通过对胚胎整个体外培养阶段进行监测，保证观察过程中胚胎发育环境的稳定，还能获取胚胎发育各个阶段的形态以及各事件发生的特定时间，为胚胎形态评估提供更为客观、精准的方式，进而根据胚胎动力学参数有效地评估胚胎的发育潜力，为筛选出最优发育条件的胚胎进行移植。本研究旨在分析比较TLI培养和常规IVF胚胎培养对临床结果的影响，探讨TLI培养是否更有利于选择高潜能胚胎。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2016年8月-2017年5月在笔者所在医院生殖中心行体外受精/卵胞浆内单精子注射-胚胎移植（IVF/ICSI-ET）治疗的不孕症患者。纳入标准：（1）临床方案均采用标准长方案，年龄23～39岁;（2）不孕因素：女方输卵管因素、男方少弱畸精子症患者。排除标准：女性子宫因素（如子宫肌瘤、子宫内膜异位症等）及其他疾病因素（卵巢储备功能下降、染色体异常、多囊卵巢综合征等）。由于Primo Vision胚胎培养皿（Vitrolife，瑞典）最多只能放置16个胚胎，所以所有入选周期2PN受精数≤16个。试验中所有患者被随机分成TLI组和常规IVF组。其中58例周期采用TLI培养和125例采用常规培养方法。两组患者年龄、BMI、不孕年限、基础FSH、基础E2、基础LH、基础窦卵泡数、Gn天数和Gn剂量比较差异无统计学意义（P>0.05），见表1。

1.2 方法

1.2.1 取卵受精 取卵后根据临床指征行IVF或ICSI。IVF授精：受精浓度为5×106/ml，过夜受精;ICSI授精：捡卵4 h剥除颗粒细胞后行ICSI。

1.2.2 胚胎培养 常规组将脱颗粒胚胎转移至卵裂皿（G-1 Plus，Vitrolife，瑞典）观察胚胎发育情况;TLI组将正常受精胚胎转移至Primo Vision专用培养皿（well of the well）[7]，置于时差监测系统。设置拍摄间隔频率为10 min，7个等距的焦平扫描间隔频率1 h，连续拍摄3 d。

1.2.3 胚胎質量评估 常规组培养至第3天，根据卵裂球数目、均一度及碎片进行评分并挑选胚胎移植[8];TLI组在常规组的基础之上参考原核消失时间（20 h 45 min～25 h）、3～4细胞的时间（<75 min）指标[9-12]。优质胚胎和可用胚胎评价指标参照胚胎试验室关键指标质控专家共识[13]。

1.3 观察指标及评价标准

观察两组培养胚胎发育情况及培养临床结局情况。移植后4～6周阴道B超下出现孕囊和胎心为临床妊娠。移植后4～6周阴道B超下出现孕囊数量与移植胚胎数目之比为种植率;一次妊娠同时怀有2个及以上的胎儿时称为多胎率;累计移植次数指在一个药物刺激周期获得全部胚胎经过鲜胚或冻胚移植的总次数;累计妊娠指在一个药物刺激周期获得全部胚胎经过鲜胚或冻胚移植后获得临床妊娠。

1.4 统计学方法

采用SPSS 19.0软件对数据进行处理，计量资料以（x±s）表示，采用t检验，计数资料以率（%）表示，采用字2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组胚胎发育结果比较

TLI培养周期和常规IVF培养周期的患者的获卵数、卵子成熟数、2PN受精数、2PN卵裂数、D2优质胚胎数、D3优质胚胎数和D3可用胚胎数比较差异无统计学意义（P>0.05），见表2。

2.2 TLI和常规培养临床结局

TLI培养周期和常规IVF培养周期患者的移植数量、子宫内膜厚度、多胎率、流产率、累计移植次数比较差异无统计学意义（P>0.05），但是两组新鲜临床妊娠率比较差异有统计学意义（P<0.05），见表3。

3 讨论

Azzarello等[9]通过time-lapse对159个移植正常受精胚胎活产婴儿结局发现其原核消失时间早于20 h 45 min的胚胎没有活产现象，结合Lemmen[8]的研究可以推测活产的胚胎原核消失应该在20 h 45 min～25 h，同时Meseguer等[11]将胚胎卵裂参数与临床结果结合起来，发现3个胚胎着床能力相关的参数分别是：（1）分裂到5细胞的时间t5在48.8～56.6 h;（2）第二次卵裂的同步性s2在0.76 h以内;（3）第二个细胞周期的持续时间，即分裂2细胞和3细胞的时间间隔cc2在11.9 h。因此本研究在TLI培养周期选取的移植胚胎均参考原核消失时间和第二次卵裂同步性作为标准与常规IVF培养周期的患者进行对照研究，发现在移植相同数目的胚胎情况下，TLI培养周期的新鲜妊娠率显著高于常规IVF培养周期（P<0.05），多胎率（35% vs 20.6%）和种植率（40.6% vs 29.5%）虽然TLI培养周期高于常规培养周期，但是差异不显著（P>0.05），可能与例数较少有关，当有较多优质胚胎可选择时运用TLI技术结合胚胎分裂模式挑选胚胎可以提高临床妊娠率。这与唐永梅等[14]和梁泳娜等[15]研究相反，据分析可能与入组患者年龄偏大及观察受精卵数少，平均移植胚胎数少（平均移植1.3 个胚胎或囊胚）有关。

另外本研究还发现TLI培养周期和常规IVF培养周期的在累计临床妊娠的情况下，虽然TLI培养周期的累计妊娠率高于常规IVF培养周期，但无显著性差异（P>0.05），另外累计移植妊娠的次数无显著差异（P>0.05），这也间接说明除了挑选胚胎的重要性以外，还有方案、子宫内环境、人员操作、培养基、患者自身情况等其他因素也会导致临床妊娠率的变化。不过针对预后性较好的年轻患者，可以通过TLI技术筛选单个发育潜能最佳的胚胎进行移植，可以降低单胎率。

综上所述，通过时差成像系统观察胚胎动力学参数及卵裂模式等事件判断胚胎的发育潜能，为临床提供最佳优质胚胎进而改善临床结局;同时时差成像系统从另一个角度给胚胎学家提供一个新的视野，对未使用时差成像系统进行挑选胚胎时提供新的思路。

参考文献

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[2] Drábková P，Andrlová L，Hampl R，et al.Changes in the levels of selected metabolites in the culture medium as a possible tool for the embryo selection in assisted reproduction[J].Ceska Gynekol，2015，80（2）：135-139.

[3] Kort D H，Chia G，Treff N R，et al.Human embryos commonly form abnormal nuclei during development：a mechanism of DNA damage，embryonic aneuploidy，and developmental arrest[J].Hum Reprod，2016，31（2）：312-323.

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[13]石江霞，张硕屏，龚斐，等.延时摄像在人类辅助生殖技术中的应用[J].国际妇产科学杂志，2013，40（4）：358-365.

[14]唐永梅，秦祖兴，李忻琳.胚胎培养密度对胚胎发育潜能的影响[J].中国优生与遗传杂志，2018，26（1）：118-120.

[15]梁泳娜，梁见弟，陈燕锋，等.时差成像系统挑选优质胚胎对IVF-ET妊娠结局的改善作用[J].中国医药科学，2018，8（17）：13-17.

（收稿日期：2019-05-30） （本文编辑：张亮亮）