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凡纳滨对虾野田村病毒RT-PCR检测方法的建立及应用

2019-04-13张文文胡芳源唐绍林

广东海洋大学学报 2019年2期
关键词:检测

雷 燕,肖 洋,王 娟,张文文,胡芳源,唐绍林

(1.广州利洋水产科技股份有限公司, 广东 广州 510515;2.广州金水动物保健品有限公司, 广东 广州 510515)

凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)又称南美白对虾,是我国重要养殖虾种,为世界上养殖产量最高的三大优良虾类之一[1]。然而随对虾养殖业的发展,养殖环境恶化,凡纳滨对虾养殖中的病害问题日益严重。近年来,“偷死病”[2-5]是困扰凡纳滨对虾养殖的主要病害之一,导致严重的经济损失。2014年,中国水产科学研究院黄海水产研究所科研人员通过组织病理学分析、人工感染实验、疑似病原基因进化分析、病毒分离纯化和荧光原位杂交等手段,证实新型野田村病毒(Litopenaeus vannamei nodavirus,LVNV)是导致凡纳滨对虾“偷死病”病原之一[6-7]。凡纳滨对虾野田村病毒隶属于野田村病毒科(Nodaviridae)的 α野田村病毒属(Alphanodavirus),是近年来发现的一种新兴病原体。感染野田村病毒的凡纳滨对虾临床症状主要为肝胰腺萎缩和发白,空肠空胃,软壳,生长缓慢,多数虾腹部肌肉发白和坏死[7]。据调查,该病毒主要引起60 ~ 80 d的虾发病,养殖环境较差的池塘死亡率高达80%[7]。

对于野田村病毒的传染源、传播途径和感染方式尚无明确结论,亦无针对性治疗方法。为及早发现养殖凡纳滨对虾是否感染野田村病毒,及时对临床发病病例进行针对性处理,有必要建立一种准确、快速、灵敏、特异的检测方法。目前,针对水产动物病原检测的方法有原位杂交、ELISA、胶体金试纸条、PCR及LAMP等,在实际检测过程中,原位杂交和ELISA耗时长,灵敏度低;……

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