李希政 张 晨 夏宏志

（1吉林省生物研究所，吉林长春130012；2吉林省农业机械研究院，吉林长春130012）

暗褐网柄牛肝菌（Phlebopus portentosus），隶属小牛肝菌科Boletinellaceae、脉柄牛肝菌属Phlebopus[1]。该菌在我国云南省分布较广，常被当地人俗称为“黑牛肝菌”，在国外见于泰国、越南、印尼、新西兰等热带国家[2]。黑牛肝菌子实体营养丰富，可增强人体免疫力，提高身体抗氧化作用，具有较高的食用价值和药用价值[3]。特别是子实体中含有亚硝酸盐还原酶，能够将过量的亚硝酸盐分解掉，应用于罐头、咸菜生产中，能够有效降低亚硝酸盐含量，具有较高的应用价值。黑牛肝菌菌丝较难保存，菌丝生长缓慢，极易老化失活。因此研究黑牛肝菌菌丝保存方法对延长保存时间，提高菌丝活力意义重大。

1 材料与方法

1.1 菌株来源

2017年从云南引进野生黑牛肝菌子实体分离培养。

1.2 培养基

母种培养基为PDA培养基，pH调至5.6。

1.3 保存方法

将供试菌株子实体进行表面消毒，取菌盖与菌柄交界无菌区切块0.5 cm，并转接至母种培养基中，27℃暗光培养纯化菌种。

对纯化的黑牛肝菌母种进行4℃冰箱冷藏和室内常温保存两个保存温度环境对比。将母种试管用专用胶塞塞严并用塑料膜包裹，尽可能降低其他因素的干扰。

母种保存30 d、60 d、90 d、180 d的转管。每次转管，每个温度处理转管30管。转管后同放在27℃培养箱内暗光培养。

观察菌丝萌发时间、菌丝满管时间、菌丝生长势，测定菌丝生长速度等。

2 结果与分析

2.1 黑牛肝菌母种不同保存方法保存30 d后菌丝活力比较

两种保存方式保存母种30 d，对黑牛肝菌菌丝活力影响无显著差异，具体结果见表1。

表1 黑牛肝菌母种不同保存方式保存30 d后菌丝活力比较

从表1可以看出，室内常温保存的黑牛肝菌母种菌丝萌发时间较4℃冰箱保存的黑牛肝菌菌丝萌发早，菌丝颜色暗黄，菌丝生长速度快，满管时间提前1.3 d。其他观察因素无明显变化和区别。可见，在短时间内保存黑牛肝菌，4℃冰箱保存和常温保存无明显区别，黑牛肝菌的菌丝活力影响不大，菌丝活力正常，无明显的老化失活现象。

2.2 黑牛肝菌母种不同保存方法保存60 d后菌丝活力比较

从表2可知，不同保存条件保存黑牛肝菌母种60 d后，黑牛肝菌菌丝活力发生了改变。常温保存的黑牛肝菌菌丝活力正常，菌落边缘整齐，长势强，生长速度较保存30 d时变化不大；4℃冰箱冷藏的黑牛肝菌菌丝活力下降较明显，出现菌落边缘参差不齐的现象，菌丝成活率下降3%。活力下降，生长速度变慢。结果表明，黑牛肝菌母种4℃冰箱冷藏条件保存时间超过30 d，会导致其菌丝活力下降，菌丝失活率增加；室内常温保存的黑牛肝菌菌丝变化差异不大，菌丝活力正常。由此可知，保存超过30 d，选择室内常温保存较理想。

表2 黑牛肝菌母种不同保存方式保存60 d后菌丝活力比较

2.3 黑牛肝菌母种不同保存方法保存90 d后菌丝活力比较

表3 黑牛肝菌母种不同保存方式保存90 d后菌丝活力比较

从表3可以看出，黑牛肝菌母种保存90 d后，4℃冰箱冷藏条件保存下黑牛肝菌菌丝活力下降明显，菌丝老化严重，成活率下降至48%，菌丝生长速度也降至3.04 mm/d。菌落边缘不整齐成为显著特征；室内常温条件保存下黑牛肝菌菌丝活力稍有下降，但仍能正常生长，菌丝长速下降至3.87 mm/d。由此说明，室内常温保存黑牛肝菌试管母种相对于4℃冰箱冷藏是保持黑牛肝菌菌丝活力的较好方法。

2.4 黑牛肝菌母种不同保存方法保存180 d后菌丝活力比较

从表4可见，无论是室内常温保存还是4℃冰箱冷藏条件保存黑牛肝菌母种，都对其菌丝活力产生较大的影响。4℃冰箱冷藏保存下黑牛肝菌菌丝成活率仅为15%，生长20 d后，菌丝生长停滞不前，已经严重失去活力，转管成活率极低；室内常温保存下黑牛肝菌菌丝活力一般，成活率94%，转管后成功率较高，菌丝老化失活现象较少。菌丝生长速度有所下降，边缘出现不整齐现象。

图1 黑牛肝菌母种室温保存90 d后转管后菌丝

图2 黑牛肝菌母种4℃冰箱保存90 d后转管后菌丝

表4 黑牛肝菌母种不同保存方式保存180 d后菌丝活力比较

3 小结与讨论

黑牛肝菌菌丝活力在低温环境中容易下降，60 d后活力明显下降，90 d后仅有部分活力，180 d后菌丝老化严重而死亡；相反，常温保存的黑牛肝菌菌丝60 d后活力同样下降，但活力仍较强，转接试管后仍能正常萌发，90 d后和180 d后仍具有活力。因此，对黑牛肝菌母种长期保存，建议应用常温保存方法，母种保存半年以上仍可活化、复壮。