王庆武 唐丽娜 李秀梅

（山东省泰安市农业科学研究院，山东泰安271000）

黑木耳（Auricularia auricular）是我国传统食用菌栽培品种[1]，市场反应较好[2]，栽培面积逐年增加[3]，但关于黑木耳菌丝的培养特性研究相对较少。为了掌握黑木耳菌丝的培养特性，了解目的菌株的生长发育特点[4]，笔者对黑木耳菌丝培养适宜的碳氮源、配方、温度和pH进行了研究，旨在为黑木耳的栽培提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 供试菌株及培养基

黑木耳菌株TH02由泰安市农业科学研究院保存。

碳源试验基础培养基（CK）：蛋白胨0.2%，KH2PO40.1%，MgSO40.05%，琼脂2%。

氮源试验基础培养基（CK）：葡萄糖2%，KH2PO40.1%，MgSO40.05%，琼脂2%。

1.2 试验方法

1.2.1 不同碳源试验

在碳源基础培养基（CK）中分别加入2%的玉米粉、葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、淀粉、果糖、乳糖7种不同碳源组成供试培养基，制作直径9 cm的平板培养基，每平板培养基倒入量一定，接入一块边长4 mm的菌块，置于恒温培养箱中25℃暗培养。每处理5个重复。

1.2.2 不同氮源试验

在氮源基础培养基（CK）中分别加入0.2%的酵母膏、麸皮、牛肉膏、NH4NO3、（NH4）2SO4、蛋白胨6种不同氮源组成供试培养基，其他方法同1.2.1。

1.2.3 不同碳氮比试验

最佳碳、氮源选定后，采用L9（34）法进行正交试验，试验方法同1.2.1。

1.2.4 不同培养温度试验

采用以上试验最佳配方，制作直径9 cm的平板培养基，每平板培养基倒入量一定，接入一块边长4 mm的菌块，分别置于15℃、20℃、25℃、30℃、35℃、40℃、45℃共7个处理温度，恒温培养箱中暗培养。每处理5个重复。

1.2.5 菌丝致死温度测定

无菌条件下，挑取边长4 mm、厚2.5 mm的菌块置于2 mL无菌离心管中，每管放5块，分别置于50℃、51℃、52℃、53℃、54℃、55℃、56℃共7个温度水浴锅中处理10 min后，再将菌块无菌条件下置于平板培养基上，于培养箱中30℃培养。每处理5个重复。

1.2.6 不同pH试验

pH设4、5、6、7、8、9、10共7个处理，平板制作方法同1.2.4，置于恒温培养箱中30℃暗培养。每处理5个重复。

1.2.7 统计分析

各处理培养7 d，采用“十”字交叉法测量菌落直径，计算各处理菌丝日生长速度，分析各处理对菌丝生长的影响。

2 结果与分析

2.1 不同碳源对黑木耳菌丝生长的影响

由表1可以看出，在不同碳源培养基上黑木耳菌丝生长速度、长势和菌落形态均不同，在玉米粉为碳源的培养基上，菌丝生长速度最快，达到3.53 mm/d，且菌丝长势好、菌落边缘整齐；在葡萄糖培养基上菌丝生长速度较快，菌丝长势较好、菌落边缘较齐；乳糖培养基上菌丝生长速度最慢且不及对照，长势差、菌落边缘不整齐，其他碳源培养基上菌丝生长速度一般、长势均较好、菌落边缘均不整齐。

表1 不同碳源对黑木耳菌丝生长的影响

2.2 不同氮源对黑木耳菌丝生长的影响

由表2可以看出，在不同氮源培养基上黑木耳菌丝生长速度、长势和菌落形态均不同，在酵母膏为氮源的培养基上，菌丝生长速度最快，达到4.20 mm/d，且菌丝长势好、菌落边缘整齐；在麸皮培养基上菌丝生长速度较快、菌落边缘整齐，但菌丝长势差；在牛肉膏培养基上菌丝生长速度较快、菌落边缘较齐，但菌丝长势好；在NH4NO3和（NH4）2SO4培养基上菌丝生长速度一般、菌落边缘较齐，但菌丝长势差；在蛋白胨培养基上菌丝生长速度最慢、菌落边缘不齐、菌丝长势较好。

表2 不同氮源对黑木耳菌丝生长的影响

2.3 碳氮比对黑木耳菌丝生长的影响

由表4可以看出，4个单因子对黑木耳菌丝生长速度的影响顺序为B＞A＞C＞D，即葡萄糖影响最大，其次是玉米粉、酵母膏，牛肉膏影响最小，在4个单因子组成的培养基上菌丝长势均好。极差分析结果表明，各因素对菌丝生长的最佳碳氮组合为A1B1C1D3。

表3 正交试验因素水平

表4 L9（34）正交试验结果

2.4 不同培养温度对黑木耳菌丝生长的影响

由表5可以看出，在不同培养温度黑木耳菌丝生长速度、长势和菌落形态均不同。在15～45℃菌丝均可存活，35℃培养菌丝生长速度最快，达到5.66 mm/d，且菌丝长势好、菌落边缘整齐，其次是培养温度30℃；25℃菌丝生长速度一般、菌丝长势较好，菌落边缘整齐；20℃以下菌丝生长较慢、菌丝长势一般、菌落边缘较齐；40～45℃菌丝只萌发，但不致死。

表5 不同温度对黑木耳菌丝生长的影响

2.5 菌丝致死温度

由表6可以看出，菌丝在53℃及其以下温度处理10 min后，再放回至常温培养菌丝均能萌发、恢复生长，菌落边缘整齐；菌丝在54℃处理10 min后，常温下菌丝萌发数减少，表明此温度为临界致死温度；菌丝在55℃及其以上温度处理10 min后，常温下菌丝均未萌发，菌丝致死；随处理温度的提高，常温下菌丝长满平板天数增加、长势减弱。

表6 菌丝致死温度测定结果

2.6 pH对黑木耳菌丝生长的影响

由表7可以看出，菌丝在供试pH条件下均能生长，且菌丝长势均好、菌落边缘均整齐。菌丝在pH为6时，菌丝生长速度快，达到5.25 mm/d，其次是pH为7；pH低于6或高于7时菌丝生长速度均下降，但高过低pH更不利于菌丝生长。

表7 不同pH对黑木耳菌丝生长的影响

3 小结与讨论

黑木耳菌丝在无碳、氮源培养基上，菌丝长势均最差、生长速度慢、菌落边缘不齐，在添加碳、氮源培养基上菌丝普遍转好，但有差异，表明菌丝生长需要适宜的碳、氮源，适宜的碳源为玉米粉和葡萄糖，且植物性碳源优于糖类。氮源对菌丝生长有一定的促进作用[5]，以酵母膏、牛肉膏为氮源时，菌丝长速、长势、菌落边缘整齐度均较好，而麸皮作为氮源时，虽然菌丝长速快，但菌丝长势差，不宜作为培养黑木耳氮源。菌丝生长需要适宜的碳氮比[6]，适宜的碳氮源组合为玉米粉1%，葡萄糖2%，酵母膏0.1%，牛肉膏0.4%。

温度对黑木耳菌丝生长影响较大，较低和较高温度均不适宜菌丝生长，较适宜的菌丝生长温度为25～35℃，这与姚占芳等[7]得出的最适温度为25～30℃下限结果一致，但上限结果不一致，可能与供试菌株不同有关。高温一直是限制生物生长发育的一个重要因素[8]，试验表明黑木耳菌丝最低致死温度为55℃、10 min。

微生物生长和生物合成都有其最适和能够耐受的pH范围[9]，pH过低或过高均不利于黑木耳菌丝生长，较适宜菌丝生长pH为6～7，这比姚占芳等[7]试验得出的最适pH为5～6略高。试验表明菌丝在偏碱条件下比在偏酸条件下长速快，可利用这一特点，驯化、筛选耐碱菌株，减少杂菌污染[7]。