姜慧祯，刘学杰,王军栋，崔小菲，刘晓静，李星辰，李俊强

(烟台市食品药品检验检测中心，山东 烟台 264670)

蒲地蓝消炎片是由黄芩、蒲公英、苦地丁、板蓝根4味药材制成的中药复方制剂，具有清热解毒、抗炎消肿的作用,临床上主要用于治疗疖肿、腮腺炎、咽炎、淋巴腺炎、扁桃腺炎等症[1-2]。该制剂现执行标准为卫生部颁药品标准第三册(标准编号为WS3-B-0649-91)和各企业申请原国家食品药品监督管理局批准的单页标准，部颁标准收载项目包括性状和常规检查项，其他各企业自己申请的企业标准，检验项目设置参差不齐，存在个别企业利用质量标准的缺陷，少投或投劣质药材的风险，本研究在充分考察了蒲地蓝质量标准和相关文献的基础上[3-5]，采用了显微及薄层色谱对处方中的黄芩进行了鉴别，采用简单易操作且受干扰较少的薄层色谱法对蒲公英、苦地丁以及板蓝根进行定性分析，本文用高效液相色谱(HPLC)方法对黄芩中黄芩苷的含量测定进行了研究，结果表明，HPLC法能够有效地测量蒲地蓝消炎片中黄芩苷的含量，通过此方法能够较好的对蒲地蓝消炎片的质量进行控制。

1 仪器与试药

奥林巴斯 BX51 电子显微镜；安捷伦1200高效液相色谱仪；岛津 Auw120D电子天平；昆山市超声仪器有限公司KQ-300DE型数控超声波清洗器。硅胶G板购自青岛基亿达硅胶试剂有限公司；甲醇为色谱纯(Honeywell)；水为Millipore制水机制备；其他试剂为分析纯(国药集团化学试剂有限公司)。

黄芩对照药材(批号：120955-201309)、黄芩苷(批号：110715-201720，供含量测定用，含量以93.5%计)、咖啡酸对照品(批号：110885-200102)、苦地丁对照药材(批号：120990-201406)、板蓝根对照药材(批号：121177-201608)、(R，S)-告依春对照品(批号：111753-201706,含量以100.0%计)均购自中国食品药品检定研究院。试验中所用蒲地蓝消炎片(批号：170901、170902、170903)及阴性样品由烟台渤海药物研究院自制。

2 黄芩的显微鉴别

取本品10片，除去包衣，研细，取约2 g，加10倍量水搅匀，放置，弃去上清液，取沉淀物，采用水合氯醛装片，置显微镜下观察：韧皮纤维单个散在或数个成束，梭形，长60～250 μm，直径9～33 μm，壁厚，孔沟细。石细胞类圆形、类方形或长方形，壁较厚。木栓细胞棕黄色，多角形。网纹导管多见，直径24～72 μm。木纤维多碎断，直径约12 μm，有稀疏斜纹孔[6]。

3 薄层色谱鉴别

3.1 黄芩 取本品适量，研细，取本品粉末2 g，加乙酸乙酯-甲醇(3∶1)的混合溶液30 mL，置100 mL圆底烧瓶水浴回流30 min，放冷至室温，滤过，滤液置蒸发皿蒸干，残渣加甲醇5 mL使溶解，上清液滤过作为供试品溶液[1]。另取黄芩对照药材1 g及缺黄芩药材的阴性样品2 g，同法制成对照药材溶液及黄芩阴性对照溶液。取上述制备液于同一色谱板展开，结果见图1。

3.2 蒲公英 取本品适量，研细，取粉末约2 g，置100 mL具塞锥形瓶，取约20 mL 5%甲酸的甲醇溶液至锥形瓶，超声，20 min后取出锥形瓶，滤过，滤液置蒸发皿挥干，残渣加水10 mL使溶解，将溶液转移至100 mL分液漏斗，加乙酸乙酯2次，每次10 mL，振摇提取，合并乙酸乙酯层溶液置蒸发皿挥干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液[6]。同法取缺蒲公英药材的阴性样品2 g，制备缺蒲公英的阴性对照溶液。另取咖啡酸对照品，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。取上述制备液于同一色谱板展开，结果见图2。

1.黄芩对照药材；2.缺黄芩阴性样品；3～5.蒲地蓝消炎片样品图1 黄芩鉴别薄层色谱图

1.咖啡酸对照品；2.缺蒲公英阴性样品；3～5.蒲地蓝消炎片样品图2 蒲公英鉴别薄层色谱图

3.3 苦地丁 取本品适量，研细，取粉末约2 g，置100 mL具塞锥形瓶，浓氨试液0.5 mL使润湿，加三氯甲烷10 mL，放置12 h，滤过，滤液置蒸发皿挥干，残渣加三氯甲烷1 mL溶解，作为供试品溶液[6]。另取苦地丁对照药材1 g及缺苦地丁药材的阴性样品2 g，同法制成对照药材及缺苦地丁阴性溶液。取上述制备液于同一色谱板展开，结果见图3。

1.苦地丁对照药材；2.缺苦地丁阴性样品；3～5.蒲地蓝消炎片样品图3 苦地丁鉴别薄层色谱图

3.4 板蓝根 取本品适量，研细，取粉末约3 g，置100 mL具塞锥形瓶，加80%甲醇20 mL，超声30 min，滤过，滤液置蒸发皿挥干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。取(R，S)-告依春对照品，加甲醇制备成每1 mL含0.5 mg对照品的溶液，作为对照品溶液[6]。另取板蓝根对照药材1 g及缺板蓝根药材的阴性样品3 g，按照供试品制备方法制备成对照药材溶液及缺板蓝根阴性溶液。取上述制备液于同一色谱板展开，结果见图4。

1.板蓝根对照药材；2.(R,S)-告依春对照品；3.缺板蓝根阴性样品；4～6.蒲地蓝消炎片样品图4 板蓝根鉴别薄层色谱图

4 黄芩苷的含量测定

4.1 色谱条件及系统适用性 采用Capcell PAK C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)为色谱柱，采用甲醇-水-磷酸(47∶53∶0.2)为流动相，流动相流速为1.0 mL·min-1，紫外检测器，检测波长为280 nm，柱温为30 ℃[7-8]。黄芩苷及相邻峰的分离度应大于1.5，理论塔板数按照黄芩苷峰计算不应低于3 000。

4.2 溶液的制备

4.2.1 对照品溶液的制备 精密称取黄芩苷对照品12.52 mg，置250 mL容量瓶，加甲醇适量超声使溶解，冷却至室温，加甲醇制成每1 mL含黄芩苷46.82 μg的溶液，作为对照品溶液。

4.2.2 供试品溶液的制备 取重量差异项下的本品20片(糖衣片除去包衣)，精密称定，研细，取约0.5 g，精密称定，置150 mL圆底烧瓶，加70%的乙醇40 mL，置水浴回流3 h，放冷置室温，滤过，将圆底烧瓶用少量70%乙醇分次洗涤并同滤液转移至100 mL量瓶并定容至刻度，混合均匀后，精密量取1 mL储备液置10 mL量瓶中，定容至刻度，摇匀，作为供试品溶液[3]。

4.2.3 阴性供试品溶液 取缺黄芩药材的阴性样品0.5 g，按照“4.2.2”项下方法制成阴性对照溶液。

4.3 阴性干扰试验 吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性样品溶液各10 μL，按照“4.1”项下色谱条件进行测定，结果表明：样品溶液及黄芩苷对照品溶液色谱峰表现良好，且样品中黄芩苷色谱峰分离度符合系统适用性要求，阴性样品在相应位置无干扰，结果见图5。

A.黄芩苷对照品；B.样品；C.阴性对照图5 HPLC色谱图

4.4 方法学考察

4.4.1 线性关系考察 取对照品溶液，分别按照“4.1”项下色谱条件进样1、5、10、15、20 μL，记录色谱图，以进样量(μg)为横坐标和峰面积为纵坐标进行回归，回归方程Y=12.193X-0.957 5，R2=0.999 7。结果表明，在此试验条件下，黄芩苷进样量在5.008～100.16 μg时与峰面积呈良好的线性关系。

4.4.2 精密度试验 精密吸取供试品溶液10 μL，按照上述“4.1”项下色谱条件进样5次，精确记录黄芩苷色谱峰峰面积，结果RSD为0.42%(<2%),表明仪器精密度良好。

4.4.3 稳定性试验 精密吸取供试品溶液(批号：170901)10 μL，按照“4.1”项下色谱条件进行测定。每隔2 h测定1次，共测定5次，结果供试品峰面积RSD为0.52%。表明供试品溶液在10 h内稳定。

4.4.4 加样回收率试验 分别精密称取同一批号已知含量的蒲地蓝消炎片(批号：170901，含量45.53 mg·g-1)9份，每份0.25 g，精密加入黄芩苷对照品分别为5.56、11.12、16.68 mg，按照“4.1”项下色谱条件测定黄芩苷，计算回收率，结果见表1。

表1 黄芩苷加样回收试验结果

由表1可知本测定方法的回收率高，平均加样回收率为98.87%(n=9)，RSD为0.95%,符合含量测定的要求。

4.5 样品的测定 按“4.1”项下色谱条件，取不同批号的自制样品制成供试品溶液，将对照品和供试液进样10 μL，求得含量，结果见表2。

表2 自制蒲地蓝消炎片黄芩苷含量测定结果

5 结果与讨论

5.1 本次试验共检测9批蒲地蓝消炎片样品(3批自制，6批市售)的黄芩苷含量，3批自制样品所用黄芩药材为3批，含量分别为8.1%、6.7%、8.9%，自制样品中测得的黄芩苷结果在11.38～15.11 mg/片,市售6批样品中黄芩苷的含量分别为14.17～18.21 mg/片。

蒲地蓝消炎片样品在制备以及后期处理过程中黄芩苷按照损失20%计，按照《中国药典》2015年版(一部)黄芩中黄芩苷含量不得低于8.0%，蒲地蓝消炎片每片含黄芩苷(C11H19O11)不得低于10.0 mg应为合理限度。

5.2 本研究所建立的质量控制方法简便、专属性强、重现性好，准确可靠，可有效控制蒲地蓝消炎片的质量。