刘蕾

摘要：阐述了实验室方法确认的步骤，针对方法确认终采样过程的确认、检出限验证、精密度验证、准确度验证、加标回收实验、实验室间比对、人员间比对等问题进行了研究，提出在确认过程中要采用不同浓度的检验样本进行检验，采用对比实验及增加分析次数等方式，保障新项目在实施过程当中的可靠性。

关键词：职业卫生检测；方法确认；实验室资质认定

前言

全世界每天都有成千上万个实验室在进行着无数次的检测分析，其目的可能涉及到社会各个领域的不同需求。但是，检测分析的结果如果缺乏可信性，那么这个操作就毫无价值，并且这个操作也不应该实施。而通过对检测方法的确认，可以确保操作者足以证明其个人或其所在实验室能够正确运用某方法，或该方法能够满足某一特定预期用途的特殊要求。因此，方法确认正确与否是分析操作中的一个重要程序。

1方法确认的条件和原则

1.1方法确认的条件

方法确认或者重新确认总是发生在方法、实验室、操作人员、仪器和环境的不同或发生变化时，当需要验证对某一特定预期用途所采用的方法是否能够满足特殊要求时，这就需要进行方法确认。

1.2方法确认的原则

（1）实验室正在使用的方法必须是经过充分验证并且可靠的，有必要进行进一步的工作补充一些已有的资料。

（2）很多关于方法的确认公开发表的文献都是经过合作研究完成的，并且也会有很多方法和这种确认相关，如果一种方法在很大范围内已经被使用，或已经制定为一种标准程序，那么一系列实验室的合作研究可能首选确认的这种方式。

（3）对那些没有使用由基本方法所衍生出的方法，方法确认往往依赖于同常规方直接比较进行。

（4）AOAC已经实施把多个实验室进行实验用来作为方法确认的首选方式。

1.3方法确认的内容

按照中国实验室国家认可委员会（CNAL）准则性文件CNALΠACO1：2003《检测和校准实验室认可准则》（等同采用ISOΠIEC17025：1999）51415规定，需要确认的方法包括四类：实验室设计/制定的方法、实验室采用的非标准方法、超出其预定范围使用的标准方法、经过扩充和更改的方法。若对已确认的方法进行了更改，则应将更改的影响文件化，适当时进行重新确认。方法确认包括：①详细说明有关要求（指被确认的方法应满足的某一具体预期用途的特定要求）；②确定检测方法的特性；③检查核实使用方法能够满足有关要求；④声明有效性。

2方法确认步骤

对于需要应用到的设备仪器、环境状况、人员技术等方面均需进行相应的确认，并能够给予相关的验证证实，以确保实验室能够正常的应用新检测方法，其具体步骤如下：

（1）确定新项目开展的标准规范。依据相应的技术标准或规范内容，采用适当的方法及检测程序，所选取的标准应为国家、地方或行业领域内的权威标准。

（2）检测人员在进行新项目的准备过程当中，要对项目方案内容、试剂及仪器设备等，要严格按照项目方案及标准的要求进行物品的采购，同时对于采购的新置仪器建立相关的记录档案，且按照要求進行检定。

（3）对检测记录的表格进行编制，同时还应对检测报告的格式内容进行确认。

（4）依据相关的标准及规范进行实验记录，并以此产生出相应的检测报告并送检审查，同时开展检出限及精密度准确度的检验，并进行比对实验，以确保新实施检测方法的可靠性。

（5）新方法确认过程中记录环境状况及条件。

3方法确认的技术

方法确认的技术按照CNALΠACO1：200351415规定，用于确定方法性能的技术包括：①使用参考标准或标准物质（参考物质）进行比较；②与其他方法所得结果进行比较；③实验室间比对；④对影响结果的因素做系统性评价；⑤根据对方法原理的科学理解和实践经验，对所得结果不确定度进行评价。

3.1加标回收试验

加标回收试验是在被检测样本中加入已知浓度（与样本中被测组分浓度相当）的参考物质，进行同时检测，按下式计算回收率 回收率（%）=（C1-C2）/C3×100

C1-样本添加参考物质后检测值；C2-样本检测值；C3-添加参考物质浓度。

用回收率评价准确度时须注意：a）样品中待测物质浓度和加入参考物质的浓度对回收率的影响。参考物质常加入量与待测物质浓度水平相等或接近为宜。若待测物质浓度较高，则加标后的总浓度不宜超过方法线性范围上限的90%；若其浓度小于检出限量，可按测量下限加标。在任何情况下，加标量不得大于待测物质含量的三倍。b）对回收率的要求数值是个比较复杂的问题，依分析测量方法的难易和不同类型的分析方法而变化。一般mg/kg级，应在90%以上；μg/kg级80%；更复杂的方法可低至70%；但最小不能低于70%。

3.2线性确认

对于任何定量的方法，都需要确定被分析物浓度的适用范围，这里提到的浓度范围是实际测量的溶液。在工作范围内可能存在线性反应范围，在线性范围内信号反应与被分析物的浓度呈线性相关，因此，过高的浓度通常会受到反应系统各种因素的影响，过低的浓度可能会受到检测限量的限制。建立标准曲线确定线性范围必须建立多个标准点，一般分两个步骤：a）空白附加参考物质：在不同浓度（或数量级）范围的参考物质+空白样本（除空白外少需要6个浓度），以操作反应信号为y轴，以操作浓度为x轴，制作标准曲线，确定各种浓度范围的最大和最小线性范围。b）回归计算：在各浓度（或数量级）范围，用至少6个不同浓度的参考物质或加强空白样本，以操作反应信号为y轴，以操作浓度为x轴，制作标准曲线，或进行线性回归计算，或通过操作系统确定回归方程。

3.3检出限

检出限即为相关的分析方法在所给出的置信度当中，从采集到的样本中检测出待测样品的最小浓度数量值。不同的分析方法和标准检出限不同，由于实验室环境不同，在进行检测方法认定中，应准确测量出实际检出限数值，看是否符合该方案和标准的检出限的实际要求。若未能达到检出限的数值的要求，则要从实验过程中逐一排查，寻找原因，最终能够符合检出限的数值要求。

3.4精密度

（1）仅对标准样本进行精密度的检测。采用浓度为校准曲线最高浓度的0.1或0.9倍的标准溶液，同时对采集的标准样本以及加入标准溶液两种检测样本内容，均应达到三种或三种以上。

（2）对于采集到的标准样本要检测其在不同浓度下的精密度数值，对于同一样本至少要检测两种浓度的标准溶液，同时进行至少6次的检验。

（3）在精密度的检验当中采用检测标准当中的误差数值作为差异分析，其具体的可靠性将会受检测次数的干扰，因此必须要重复能够多的检验次数才能获得较为可靠的检测数值，建议进行分析的次数应当至少达到5次或以上。

3.5准确性

测定标准物质或质控样。标准物质或质控样是由权威机构给出准确量值，与检测样品基质相同的物质，检测时和样品同样处理和测定。计算测定值与标准物质和质控样给定值之间的误差，如果误差在标准物质和质控样允许范围之内，或相对误差小于10%，则表示该测定结果是准确可靠的。

3.6实验室间比对

实验室间比对是由上一级实验室（或相关技术机构）对下级实验室提供质控样品或盲样，检测结果由分发质控样品或盲样的实验室进行统计评价，以考核方法的可靠性。

4结论

综上所述，方法确认的内容和进行方法确认的方法。在开展新项目的过程中，一方面要对仪器设备及相关的环境检测工作人员进行严格的选取，另一方面还应当依据相关的标准方法及手段对其进行确认，特别是要加强对于所采集样品的现场试验、空白试验、加标回收率、精密度以及检出限的验证确定。此外，在精密度及准确度的检验程序当中，应该采用不同浓度的试验样本同时进行检验验证，通过对比试验，以及增加分析次数等的方式，来保障新项目在进行过程当中的可靠性。

参考文献

[1]李忠华.环境监测实验室质量控制技术及问题分析.〖J〗科技与生活，2011（3）

[2]刘卓慧.实验室资质认定工作指南（第二版）〖M〗.北京：中国计量出版社，2012

（作者单位：嘉兴嘉卫检测科技有限公司）