杜明镜，周陈锋，徐丽华，施林峰，王丽敏，朱益新

（杭州中美华东制药有限公司，浙江杭州310011）

醋酸卡泊芬净（默克医药公司开发，商品名：Cansidas，英文名：Caspofungin Acetate，CAS：179463-17-3，分子式：C52H88N10O15·2 (CH3COOH) ，分子量：1213.42，结构式见图1）是2001 年2 月首个上市的棘白菌素类药物[1]，其特点是具有广谱抗真菌活性，尤其对耐氟康唑和两性霉素B 念珠菌的抗菌活性较高，对其他念珠菌，如热带念珠菌、光滑念珠菌、克柔念珠菌等也有抗菌效果，而且由于其独特的作用于细胞壁的抗菌机理，不良反应率低[2]。

目前醋酸卡泊芬净大多采用发酵法得到母核纽莫康定B0，然后通过多步合成得到卡泊芬净粗品，合成步骤伴随着多步高压制备纯化，最后得到卡泊芬净粗品（图1）[3-4]。高压制备是当前制药企业常用的分离纯化方法，其特点是分离效果好，周期短，回收率高，但存在填料较贵，对工艺要求高等缺陷，其中填料与工艺的适用性与杂质分析是当前高压制备的难点之一[5-6]。

在多次的制备实验过程中，我们偶然发现在卡泊芬净粗品（即D2与乙二胺的反应产物）纯化过程中，柱再生阶段时，回收液经储存后会产生少量无色针状晶体，过滤得到该晶体，发现其HPLC 出峰与工艺所用物料和中间体都无法匹配。由此，我们对此偶然得到的杂质展开了研究，希望能借该杂质研究进一步丰富对工艺的理解，以降低产品生产的风险。

图1 三步法合成卡泊芬净粗品

1 实验试剂和设备清单

主要试剂为食用级乙醇和纯化水，其余为自备的检测试剂。主要设备清单见表1。我们无法得知杂质在其中的出峰时间和归一化含量。以此作为原料进行养晶实验。

表1 实验设备清单

2.2 养晶

对上一步得到的再生浓缩液，过滤除去大颗粒，然后将其置于2℃～8℃环境中，静置12 h，观察到有规则的无色透明针状晶体生成，见图2。

2 实验步骤与讨论

2.1 杂质富集

根据偶然发现，我们认为杂质出现在制备柱再生环节。因此首先将多个中试批次制备再生液合并（再生体系：95% 乙醇），然后用旋蒸仪50℃下旋蒸，得到了高浓度的再生合并液，pH=7.8，呈淡黄色液体状。由于再生合并液里物质成分复杂，HPLC 峰交错，分离度不好，

图2 杂质晶体

2.3 结构鉴定

上一步得到的杂质晶体，过滤，低温旋干后得到白色固体粉末。HPLC 显示归一化纯度为93% ，见图3。然后，进行H NMR 和C NMR 分析，见图4 和图5。

图3 杂质HPLC 分析

图4 杂质H NMR 图

图5 杂质C NMR 图

由此，结合MS 结果（MW=246.31）和H NMR、C NMR结果，我们解谱分析得出结论：该物质为对甲苯二硫酚（见图6），其为产品反应液中掉落的苯硫酚残基在溶液中形成的二聚体，或者也可能是在高压制备柱的碎填料间形成。

图6 对甲苯二硫醚结构式

对甲苯二硫醚（英文名称:1,2-di-p-tolyldisulfane，分子式:C14H14S2，分子量:246.39，CAS: 103-19-5），具有使皮肤过敏和眼睛发炎的危害，并可导致呼吸道发炎，在制药产业中要注意避免直接吸入，不能直接排入下水道，需随生产废液一起进行合法处理和转移。

2.4 生产工艺改进

由以上结果可知，该杂质产生于D3 制备过程中，可能是在制备母液中形成的，也可能是在高压的碎填料间形成的，而且该杂质与C18 基质的填料结合牢固，只有在95% 乙醇洗涤时，才会缓慢洗脱出来。因此，我们有意延长了生产工艺中的洗脱步骤，改正常流速洗脱3BV 为高低流速交错洗脱8BV，最后得到的再生液中HPLC 几乎没有出峰，由此降低了产品的杂质风险。

3 结论

在不断的制备过程中，我们偶然发现了对甲苯二硫醚杂质，并着手进行分离、提取、结构鉴定。实验结果显示，在醋酸卡泊芬净的制备过程中，反应液中或制备填料中会使游离的对甲苯硫酚形成二聚体，牢牢吸附在填料上，只有在高有机相再生时才会缓慢洗脱出来。由此我们改进了制备再生工艺，降低了该杂质带入产品的质量风险。

对于制药产品来说，杂质控制是永恒的主题，关注工艺细节，关心生产过程现象，发现杂质并用科学的方法去解决杂质问题，是保障产品质量不断提升的必备手段。