王东艳，唐 超，廖彬汛，罗 俊，潘年松

（1.贵州医科大学 药理教研室，贵州 贵阳 550004；2. 遵义医药高等专科学校，贵州 遵义 563002；3. 黔西南州人民医院，贵州 兴义 562400）

辣蓼（Polygonum flaccidumMeissn.），又称水蓼、柳蓼、蓼牙菜[1]，为蓼科植物伏毛蓼Polygonum pubescensBlume 的干燥全草。传统中医理论认为其性味辛，温。现代药理研究表明其具有抗微生物、杀虫、抗菌、抗氧化、抗肿瘤等药理作用[2-3]。辣蓼作为常用的中草药，也广泛应用于小曲酒和黄酒的酿造[4]。贵州属于喀斯特地貌，重金属含量较高，其地形对辣蓼的根、茎、叶和种子的形态特征是否有影响需进一步探讨，辣蓼的重金属含量是否符合标准，关乎黔产辣蓼的用药安全性问题。故本实验将考察黔产辣蓼的形态特征，并检测金属元素含量，为黔产辣蓼的药用安全性评价及综合开发利用提供理论基础。

1 材料与仪器

1.1 实验仪器

数码显微镜BA31ODigital（麦克奥迪）；WX- 8000 微波快速消解仪（上海屹尧）；iCAP-7000电感耦合等离子体发射光谱仪（美国Thermo Fisher Scientifc）；SAGA超纯水处理机（南京易普易达）；摇摆式高速万能粉碎机（温岭市林大机械）；万分之一电子天平，十万分之一电子分析天平（梅特勒托利多）。水合氯醛，丙三醇，硝酸和过氧化氢（优级纯，国药集团化学试剂公司）；多元素标准溶液（国家有色金属及电子材料分析测定中心）。

1.2 实验药材

黔产辣蓼，采于遵义市湄潭县复兴镇遵义绿普森农业有限公司种植基地。

2 方法与结果

2.1 显微鉴别

选取新鲜辣蓼的根、茎、叶，徒手切片法制片，置载玻片上滴加水合氯醛试液在酒精灯上加热透化后，滴加甘油乙醇试液，制成临时切片，于显微镜下观察显微特征。

2.1.1 茎横切面 辣蓼茎横切面：表皮细胞1列，外被角质层，皮层由薄壁细胞构成，多呈厚角组织状。韧皮部较窄，韧皮纤维束月牙形，位于维管束上方排列呈环状，维管束呈环状排列。由单个或数个导管聚集的木质部，呈放射状排列。木射线较宽，髓由薄壁细胞组成，为类圆形，髓中细胞逐渐消失形成空洞，见图1。

图1 辣蓼茎横切面（40×）

2.1.2 辣蓼叶表面观 辣蓼上表皮细胞不规则多角形，垂周壁较平直，其下有类圆形的分泌细胞；下表皮细胞垂周壁波状弯曲；上下表皮均有气孔、腺毛及非腺毛，以下表皮较多。气孔为平轴式椭圆形，少数不定式或不等式，副保卫细胞常为2～4个。见图2。

图2 辣蓼叶表面观（100×）

2.1.3 叶横切面 辣蓼叶横切面：上下表皮细胞呈类方形，上表皮一层，具有较厚的角质层，下表皮气孔较上表皮多。栅栏组织位于上表皮之下，细胞呈圆柱型，叶肉细胞内含草酸钙簇晶，维管束外韧型，木质部发达，导管单个径向排列。韧皮部细胞多角形，木质部上方及韧皮部下方均有纤维。见图3。

图3 辣蓼叶横切面（100×）

图4 辣蓼根横切面（100×）

2.1.4 根横切面 辣蓼根横切面：木栓层为数列棕色的木栓细胞，其皮层较宽，细胞排列疏松，有明显的细胞间隙，韧皮部由数列类椭圆形的薄壁细胞组成。木质部宽广，导管较大，射线细胞2～3列，木纤维紧密排列，见图4。

2.2 重金属含量检测

2.2.1 样品前处理及微波消解 将不同月份的辣蓼分别用自来水、双蒸水、去离子水清洗干净，烘干，粉碎，过药典3号筛，备用。精密称取0.2100 g待测样品于50 ml密闭式聚四氟乙烯的微波消解罐中，加入3 ml硝酸在智能控温电加热器中预消解3 h后，再加入1 ml过氧化氢，置于设定的微波消解条件下进行消解。消解完毕后，冷却至室温，打开消解罐，用少量超纯水冲洗上盖内壁，合并至罐中。置消解罐中于140～160 ℃智能控温电加热器中赶酸，待赶酸完全后，再用超纯水洗涤消解罐3～5次，洗液合并置入50 ml塑料量瓶，用水定容至25 ml，同法制备空白溶液备用，待测。微波消解程序见表1 。

表1 微波消解程序

2.2.2 ICP-OES仪器工作参数 ICP 射频功率1200 W，等离子体气(氩气)流速15 L/min，雾化气流速0.6 L/min，低波范围10，高波范围7，辅助气流速0.5 L/min，样品冲洗30 s，重复测定次数为3次，分析泵速为50 r/min，雾化器压力0.2 MPa，等离子观测方式：水平观测。

2.2.3 标准曲线的制备 精密吸取2 ml含有多元素标准溶（100 μg/ml），用10 %的硝酸定容至200 ml，制成1 μg/ml多元素标准品贮备液。精密量取多元素标准品贮备液适量，用2 %硝酸溶液稀释制成每1 ml含银(Ag)、铝(Al)、砷(As)、钡(Ba)，钙(Ca)、镉(Cd)、钴(Co)、铬(Cr)、铜(Cu)、铁(Fe)、镓(Ga)、锗(Ge)、汞(Hg)、钾(K)、镁(Mg)、锰(Mn)、钼(Mo)、锂(Ni)、铅(Pb)、锑(Sb)、锡(Sn)、锌(Zn) 0，50，100，200，500 ng/ml系列浓度的混合溶液。待ICPOES仪器在最佳条件下稳定30 min后，先以配制的标准溶液建立工作曲线进行校正，再测定样品溶液。在各元素的最佳分析波长下，对空白试液溶液连续测定10次，将标准偏差的3倍作为各元素的检出限，以吸光度Y为纵坐标，相应元素标准溶液质量浓度X（ng/ml）为横坐标，作标准曲线并确定其相关系数（r）及RSD，结果见表2。

表2 元素线性关系考察结果（n=10）

2.2.4 样品加标回收实验 取消化好的辣蓼样品，分别加入一定已知浓度待测元素的标准溶液，各元素加标回收试验结果见表3。

表3 各元素加标回收试验结果（n=3）

2.2.5 含量检测 称取不同月份辣蓼的中草药粉末（过3号筛）约0.2 g，精密称取，按2.2.1方法制备供试品溶液，按2.2.2的ICP-OES测定条件进行测定，在测定过程中，每测完一个样品，用5 %硝酸雾化冲洗后再进行下一个样品的测定。在同样的分析条件下进行空白扣减试验，根据仪器要求扣除空白干扰，得到各元素的含量。结果见表4。

3 讨论

不同品种、不同基源的中药材在显微结构上会有明显差异，可作为中药材种属鉴定的重要依据。全国各地有将下列五种同属植物作为辣蓼用：丛枝蓼、长鬃蓼、酸模叶蓼、多穗蓼、蚕虫草[5]。本实验采用了显微鉴别法对基地辣蓼的根、茎、叶等显微特征进行了系统研究，辣蓼的茎部结节膨大，根的维管束宽广，可见中柱鞘纤维成束；茎的横切面中木质部导管呈放射状排列，髓部细胞大，中心部分常呈空隙；叶的上下表皮均有多列性非腺毛、腺毛及气孔，以下表皮较多，气孔平轴式，少数不定式或不等式。可用于基地产辣蓼根、茎、叶的显微鉴别。

表4 不同月份辣蓼中22种痕量元素含量/mg·kg-1

根据文献[6-7]方法，本实验采用硝酸和过氧化氢3:1的组合对样品进行微波消解的前处理方法，可完全消解样品至澄清的液体，所用试剂及微波消解方法较安全、有效、不易造成消解损等优点。本实验采用微波消解-电感耦合等离子发射光谱法（ICP-OES）直接测定样品中的元素含量，呈现良好的线性关系，工作曲线相关系数均大于0.995，该方法快速简便，稳定性好，可满足大部分元素的检测要求。由表3可见，辣蓼中微量元素含量丰富，不同月份的辣蓼样品中Ca、K、Mg、Ag、Mn、Fe、Al、Zn元素含量较高，各元素相对标准偏差在0. 244 %～2.681 %之间。重金属的含量超标是中药不良反应中最突出的问题之一[8-9]。参照2015年版《中国药典》[10]和我国对外贸易经济合作部颁布的《药用植物及制剂进出口绿色行业标准》[11]重金属及砷盐限量指标，As≤2.0 mg/kg，Pb≤5.0 mg/kg，Hg≤0.2 mg/kg，Cu≤20.0 mg/kg，Cd≤0.3 mg/kg，由表3可见，不同月份辣蓼中的As、Cu、Hg、Cd、Pb含量均符合《药用植物及制剂进出口绿色行业标准》。本研究通过测定不同月份辣蓼中的重金属及痕量元素含量，为基地产辣蓼的质量控制及检测提供参考依据。