方宁 刘娟花

(1咸阳职业技术学院，陕西 咸阳 712046；2陕西中医药大学第一附属医院)

哮喘是由多种细胞(以肥大细胞、嗜酸粒细胞浸润为主)和细胞组分参与的慢性气道炎症性疾病，以气道高反应及慢性气道炎性反应为主要特征。加味苏子降气汤对哮喘患者在缓解症状、降低副作用等方面均有较好的疗效。本实验通过观察加味苏子降气汤对哮喘大鼠体内细胞因子水平的影响及对免疫网络的调节，进一步探讨加味苏子降气汤治疗肾阳虚证哮喘的免疫机制。

1 材料与方法

1.1实验动物 清洁级SD大鼠,雄性,40只，体重(160±20)g，月龄6～9个月，由西安交大实验动物中心提供，实验前于实验室正常饲养1 w，分笼饲养，自由进食进水，饲料由西安交大实验动物中心统一提供，为标准颗粒饲料。饲养实验室采光、通风良好，室温约25℃。

1.2药物及试剂 加味苏子降气汤由紫苏子、半夏、当归、前胡、厚朴、肉桂、甘草等中药组成，购于陕西中医药大学校医院。采用自动煎药机煎药，密封包装，每包100 ml，每毫升含生药 1 g。哮喘模型致敏剂卵清白蛋白(OVA)，Sigma公司产品(分装)；氢氧化铝，购于天津市博迪化工有限公司；灭活百日咳杆菌疫苗来自上海生物制品研究所；灵芝孢子粉，购自陕西大至医药有限公司。白细胞介素(IL)-4、干扰素(IFN)-γ检测所用酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒购于武汉博士德公司。

1.3主要器材 FAl004N电子天平，上海精密科学仪器公司；CC2170A超声雾化器，成都维信电子科大新技术有限公司；SHHW21-600电热恒温水箱，天津市泰斯特有限公司；RT-2100C酶标分析仪，深圳雷杜电子有限公司。

1.4动物分组及哮喘模型制造 大鼠随机分为正常对照组、哮喘模型组、加味苏子降气汤组和地塞米松组，每组10只。除正常对照组外，其余3组参照文献〔1〕制造哮喘模型。首先进行致敏，分别于第1、7天经腹腔及四肢末端注射致敏液1 ml(含OVA 0.1 g，氢氧化铝0.1 g，百日咳杆菌原液5×109个/ml)；于第14天开始，将模型大鼠置于密闭容器内，雾化吸入1% OVA溶液，1次/d，20 min/次，持续雾化吸入5 d，随后减为隔日1次雾化，执行至第28天。哮喘模型激发成功的标志：每次雾化时，大鼠出现抖毛、咳嗽、腹式呼吸、烦躁，甚至跌倒、抽搐等表现。正常对照组给予生理盐水代替致敏液进行致敏，致敏方式和方法同其余3组。

1.5用药 地塞米松组、加味苏子降气汤组于激发第1天开始给药。剂量：地塞米松组给予地塞米松 0.25 mg·kg-1·d-1，加味苏子降气汤组给予加味苏子降气汤2 ml·kg-1·d-1；正常对照组、哮喘模型组给予生理盐水2 ml·kg-1·d-1。给药方式均为灌胃。

1.6标本采集与检测 将实验大鼠按1.5 g/kg腹腔注射20%乌拉坦溶液，麻醉。肺泡灌洗法参照文献〔2〕，将大鼠固定在手术板上，常规消毒，剪开颈部皮肤，钝性分离，暴露气管，用手术线结扎左肺，在颈部暴露气管做一横切口，将圆头7号针头进针约1.0 cm,以“0”号手术线结扎固定，对右肺用生理盐水(37℃)3 ml进行支气管肺泡灌洗，每次保留30 s后抽出，如此反复3次,动作宜轻柔，肺泡灌洗液回收总量约8 ml，3 000 r/min离心15 min，取上清液放入Eppendof管中待测。采用ELISA检测肺泡灌洗液中IL-4、IFN-γ水平操作参照试剂盒说明书进行。

1.7统计学方法 应用SPSS17.0 软件行t检验。

2 结 果

哮喘模型组肺泡灌洗液中IL-4含量明显高于正常对照组，IFN-γ含量明显低于正常对照组，差异有显著统计学意义(P<0.01)；与哮喘模型组相比，加味苏子降气汤组、地塞米松组肺泡灌洗液中IL-4水平明显降低，差异有统计学意义(P<0.05)，IFN-γ水平明显升高，差异有统计学意义(P<0.05)。加味苏子降气汤组与地塞米松组IL-4、IFN-γ水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 各组肺泡灌洗液中IL-4、IFN-γ 水平比较

与正常对照组比较：1)P<0.01；与哮喘模型组比较：2)P<0.05

3 讨 论

哮喘是与免疫功能紊乱相关的气道慢性炎症性疾病〔3,4〕。此外，分子免疫学深入研究发现，辅助性T细胞(Th)亚群Th1和Th2之间存在着交互调节的关系，Th1/Th2失衡是哮喘发病的重要免疫学机制〔5〕，Th2分泌的细胞因子IL-4可诱发哮喘患者体内免疫球蛋白(Ig)E的生成。哮喘患者体内IL-4异常增高，Th2型免疫反应过高；哮喘患者体内Th1降低，IFN-γ生成低下，使IgE生成增加。Th1和Th2相互拮抗调节机体正常的免疫应答。Th1分泌的细胞因子IFN-γ能抑制哮喘发作〔6〕。

哮喘大多自幼发病，先天不足是其根本，其中又有部分在中年以后，因肾中阳气渐亏而哮喘宿疾复发。肾阳亏虚是哮喘宿根形成之本〔7〕。蒋朱秀等〔8〕用相同方法致敏的哮喘模型实验中，哮喘模型组大鼠血清中T 降低，证实哮喘模型大鼠有肾阳虚证及相关症候。苏子降气汤源自《太平惠民和剂局方》，是中医学治疗“上实下虚”型哮喘的名方；加味苏子降气汤在此基础上，加大了温补肾阳的功效〔9〕。方中紫苏子、半夏、当归、前胡、厚朴、肉桂、甘草等诸药合用可有效镇咳、祛痰、平喘，作用大且分散,水溶性强，起效快，镇咳作用可直达咳嗽中枢，镇咳成分为生物碱〔10〕。最终方剂通过下调IL-4、上调IFN-γ水平达到调节Th1/Th2细胞因子平衡的目的。Th1/Th2模式与中医学的阴阳学说、虚实证候、脏象学说等均有密切关系，细胞因子网络可能是中医证候的重要物质基础。故研究Th1/Th2失衡和IgE分泌是防治哮喘的新途径〔11,12〕。本实验结果显示加味苏子降气汤能明显降低哮喘大鼠IL-4含量，升高IFN-γ水平，改善Th1/Th2失衡，从而达到防治哮喘的作用。