冯言言，孔梅，孟芳，郑莉，林红，李龙飞，田振平，刘义明 ，吴连勇

（1.齐鲁动物保健品有限公司，济南 250100；2.齐鲁晟华制药有限公司，德州 251500；3.中国农业科学院饲料研究所，北京 100081）

头孢洛宁，为半合成的第一代头孢菌素类抗生素，由默沙东公司开发，商品名为Cepravin®，目前在欧盟及英联邦国家范围内广泛使用，可用于治疗奶牛干乳期乳房炎以及预防乳房内新增感染，还可作为眼用软膏，治疗由敏感菌引起的牛角膜炎、结膜炎[1～3]。头孢洛宁为白色或类白色结晶性粉末，分子式为C20H18N4O5S2·2H2O，相对分子质量为494.54，极微溶于水和甲醇，易溶于二甲基亚砜，不溶于二氯甲烷、96%乙醇和乙醚，可溶解于稀酸和稀碱溶液[1,2]。

头孢洛宁抗菌谱广，对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌均有较强的抗菌活性，并且对产β-内酰胺酶菌有很好的作用。头孢洛宁敏感菌包括金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、乳房链球菌、停乳链球菌、大肠杆菌、化脓隐秘杆菌、枸橼酸杆菌、溃疡棒状杆菌、克雷伯菌、变形杆菌等。头孢洛宁在兽医临床上主要用来治疗奶牛干乳期乳房炎以及预防乳房内新增感染[3～7]。本试验观察了头孢洛宁乳房注入剂（干乳期）对干乳期奶牛乳房感染的治疗和预防作用，为临床合理安全用药提供依据。

1 材料与方法

1.1 试验时间和地点

本试验于2016年8～11月，在北京市4个大型奶牛场进行。

1.2 受试药物与对照药物

1.2.1 受试药物 头孢洛宁乳房注入剂（干乳期），规格：250mg/3g；批号1511001，由齐鲁动物保健品有限公司提供。

1.2.2 对照药物 苄星氯唑西林乳房注入剂，规格：50万IU/10mL；批号20151218，由国内某药业有限公司提供。

1.3 试验动物选择及采样

从4个试验牧场的6 000余头奶牛中挑选临近干乳期的奶牛60头，用于本次临床治疗及预防试验。所选奶牛在试验前30d内未全身性或乳房内给予抗生素，除精神状态稍差外，未表现其他明显全身异常症状（如发热、咳嗽、流鼻液、呼吸困难、腹泻等）。

1.3.2 试验动物分组

将入选奶牛随机分成4组，每组15头，其中3个受试药物组（I、II、III)，分别为头孢洛宁乳房注入剂（干乳期）高、中、低剂量组；1个苄星氯唑西林乳房注入剂对照药物组（IV组）。

1.3.3 样品采集

试验奶牛在进入干乳期前采集两次奶样，给药前1d采第一次奶样，在给药当天注射干奶药之前采集第二次奶样，两次采样间隔24h；在干乳期结束产犊后第一次挤奶时采集第一次奶样，24h后采集第二次奶样，采样时弃去前三把奶，用灭菌试管收集奶样10～20mL，低温（4℃）保存并于6h内进行细菌学检查。

1.4 用药及观察

受试药物高剂量组向4个乳区分别注入2支头孢洛宁乳房注入剂（干乳期）；中剂量组向4个乳区分别注入1支头孢洛宁乳房注入剂（干乳期）；低剂量组向4个乳区分别注入1/2支头孢洛宁乳房注入剂（干乳期）；对照药物组向4个乳区分别注入1支苄星氯唑西林乳房注入剂。试验奶牛除不使用其他药物治疗和预防乳房感染外，其他护理常规进行。试验期间若出现其他疾病可能对本试验结果造成影响时，患牛将退出本试验，同时选择相应数量的奶牛补入本试验。

1.5 乳区SCC测定

试验奶牛在进入干乳期最后一次挤奶（用药第0日）和下次产犊后第1日挤奶时，分别采集各乳区奶样进行SCC测定。

群落生物量按乔木层和灌草层分别调查。样地中的胸径(DBH)<3 cm 的乔木及乔木幼苗[24]和灌木统归为灌木，进行生物量和物种数测定。识别并登记20 m×20 m样方内树高(TH)≥1.2 m和胸径(DBH)≥3 cm的所有乔木物种。记录3类系统中1 m×1 m样方中草本的种类、多度以及次生林5 m×5 m灌木的种类、数量。草本、藤本和灌木生物量以全割法实测，取样鲜重(G鲜)后带回实验室，105℃杀青后，用电热烤箱在80℃下烘干至恒重，称干重(G干)，得到样品含水量并计算样点生物量。乔木生物量采用公式[25]计算。生物量均只包括地上部分。

1.6 乳区病原菌检测

试验奶牛在进入干乳期最后一次挤奶的前1d和当天，分别采集一次奶样，产犊后0d和产犊后1d，分别采集一次奶样。各时间点所采集的奶样分别进行致病菌的分离鉴定。

1.7 治疗效果判定

统计各试验组奶牛给药前两次采集奶样中致病菌检出情况和产犊后两次所采集奶样中未检出致病菌的乳区数，计算致病菌的感染率和治愈率；统计各试验组奶牛产犊后检出致病菌和给药前两次采集奶样中无此种致病菌检出的乳区数，计算各试验组奶牛病原菌的新感染率。综合评价药物对干乳期奶牛乳房感染的治疗与预防效果。

治疗失败：一种病原菌在治疗后只要有一份样品出现阳性培养结果（与治疗前样品中分离培养出的细菌相同）即为治疗失败；

治愈：一种病原菌在干奶之前被分离出来且同样的病原体在产后采集的此乳区样本中未发现，则可认为该乳区被治愈；

新感染：如果在产后分离出一种病原体，而在治疗前的样本中不存在该病原菌，则可认为该乳区为新感染。

1.8 数据统计与分析

通过统计高、中、低剂量组治愈率、新感染率及细菌分离培养情况，并与对照组进行比较，以确定受试药物防治干乳期乳房炎的临床效果。使用SPSS 18.0软件统计分析各受试药物组之间以及与对照药物组之间乳房炎主要致病菌治愈率的差异显著性。

2 结果与分析

2.1 用药前与产犊后的SCC测定结果

各试验组奶牛产犊后，牛初乳的性状、颜色等与干乳前牛乳存在差异，SCC高于干奶前牛乳（表1）。

表1 试验奶牛用药前和产犊后牛乳SCC数据比较

2.2 乳区用药前病原菌检测结果

各试验组治疗前分别两次采集奶样，给药前1d各试验组乳区细菌分离情况见表2。由相关数据可知：给药前1d采样时，高剂量组奶牛乳区感染率为43.33%(26/60)；中剂量组为40.00% (24/60)；低剂量组为38.33% (23/60)；对照组为40.00% (24/60)。4个试验组单一感染率和混合感染率分别在62.50%～84.62%及15.38%～37.50%范围内。

表2 给药前1d各试验组干奶前乳区细菌分离情况

表3 给药前0d各试验组乳区细菌分离情况

给药前0d各试验组乳区细菌分离情况见表3。由相关数据可知：给药前0d采样时，高剂量组奶牛乳区感染率为40.00% (24/60)；中剂量组为38.33%(23/60)；低剂量组为38.33% (23/60)；对照组为40.00%(24/60)。4个试验组单一感染率和混合感染率分别在69.57%～83.33%及16.67%～30.43%范围内。

2.3 用药后症状观察

各组奶牛用药后体温、呼吸、采食等表现正常。未见头孢洛宁乳房注入剂 （干乳期）和对照药物对奶牛造成的不良反应，如乳房局部肿胀、疼痛、发热等。

2.4 干乳期结束后乳房炎主要致病菌的分离情况

表4 产犊后各试验组乳房炎主要致病菌分离情况

由表4可以看出，干乳期奶牛乳区灌注高、中、低剂量的头孢洛宁乳房注入剂（干乳期）和苄星氯唑西林乳房注入剂均能对乳房炎主要致病菌的清除起到良好的作用。高剂量组由给药前两次采样的58株减少到产犊后两次采样的10株；中剂量组由63株减少到14株；低剂量组由57株减少到22株；对照药物组由63株减少到25株。与对照药物苄星氯唑西林乳房注入剂相比，高、中剂量的头孢洛宁乳房注入剂（干乳期）对干乳期乳房炎主要致病菌有更好的清除效果；低剂量的清除作用与对照药物组相当。

2.5 产犊后试验奶牛乳房内致病菌的清除情况及新增感染情况

表5 各试验组产犊后乳房炎主要致病菌治愈情况

表6 各试验组产犊后乳房炎主要致病菌新感染情况

由表5、6可知，不同剂量受试药物和对照药物对乳房炎主要致病菌（乳房链球菌、无乳链球菌、金葡菌、大肠杆菌）均具明显的清除作用。高、中、低剂量受试药物对乳房链球菌、无乳链球菌、金葡菌、大肠杆菌的治愈率分别为83.33%、100%、83.33%、87.5%，80%、75%、76.92%、81.82%，80%、75%、55.56%、72.73%；对照药物对乳房链球菌、无乳链球菌、金葡菌、大肠杆菌的治愈率分别为66.67%、80%、77.78%、76.92%。4个试验组对4种主要致病菌的治愈率无显著性差异（P＞0.05）。

受试药物高、中剂量组奶牛产犊后分别仅有1例和2例大肠杆菌新增感染，低剂量组有1例金葡菌和2例大肠杆菌新增感染，而对照药物组有1例无乳链球菌、2例葡萄球菌和2例大肠杆菌新增感染。说明高、中剂量组与低剂量组及对照药物相比，在控制产后奶牛乳房炎主要致病菌新增感染方面有更优效果。

3 讨论

国内外多篇文献报道在奶牛干乳期乳房注入头孢洛宁乳房注入剂（干乳期），能够有效治疗由金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、乳房链球菌和大肠杆菌等细菌引起的乳房炎并预防乳房内新增感染。

李维静[8]进行了头孢洛宁乳房注入剂（干乳期）防治奶牛干乳期乳房炎的药效学研究。试验随机选择60头即将进入干乳期的奶牛，在最后一次挤奶后每头牛的每个乳区分别注入一支头孢洛宁乳房注入剂（干乳期）。对入选的每头奶牛分别在干奶前以及产后1、3、5d，采集每个乳区的乳样进行体细胞计数和细菌学检查。给药后至产后14d内，每天对受试动物进行临床型乳房炎检查。研究结果显示，头孢洛宁乳房注入剂（干乳期）对干乳期奶牛乳房炎具有良好的防治效果，能够有效治疗干乳期隐性乳房炎和预防新的乳房炎感染。

Petzer等[9]研究了包括头孢洛宁在内的6种乳房注入剂产品治疗奶牛乳房内细菌感染的疗效。研究显示，头孢洛宁对奶牛乳房炎的治愈率最高，达93.9%，同时头孢洛宁能够明显降低乳区的新增感染，新增感染率仅为13.4%，这表明头孢洛宁能够有效治疗奶牛干乳期乳房内细菌感染并能有效预防新增感染。

Owens等[10]研究了头孢洛宁乳房注入剂（干乳期）治疗乳房内主要病原菌的疗效。研究显示，头孢洛宁对乳房内感染金黄色葡萄球菌的治愈率为100%，对葡萄球菌属细菌的治愈率为85%，研究表明在干乳期使用头孢洛宁乳房注入剂（干乳期）能够有效治疗乳房中的金黄色葡萄球菌等感染菌。

本试验中，头孢洛宁乳房注入剂（干乳期）对引起奶牛乳房炎的病原菌具有明显的清除作用，用药后奶牛各乳区新增感染的病原菌减少。高、中剂量组奶牛产犊后分别仅有1例和2例大肠杆菌新增感染，低剂量组有1例金葡菌和2例大肠杆菌新增感染。可见，头孢洛宁乳房注入剂（干乳期）能够有效治疗奶牛干乳期因敏感菌引起的乳房炎，并能有效预防乳房内新增感染。

4 结论

头孢洛宁乳房注入剂（干乳期）能够有效治疗奶牛干乳期因敏感菌引起的乳房炎，并能有效预防乳房内新增感染，可作为临床上治疗奶牛由金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、乳房链球菌和大肠杆菌等细菌引起的干乳期乳房炎以及预防干乳期奶牛乳房内新增菌感染的优选药物使用。临床使用方案为在最后一次挤奶后，排空乳房，乳管注入头孢洛宁乳房注入剂（干乳期），每个乳室注入1支。