洪 勇

安徽卫生健康职业学院医学技术教研室 池州 247099

缺血再灌注损伤是指心肌组织血供中断后采用溶栓等治疗措施在恢复缺血区血供的同时进一步加剧损伤并引起心脏功能障碍的现象。这一现象给缺血性心肌病的治疗增加了困难。2003年有学者首次提出缺血后处理这一手段[1]，即再灌注前给予多次短暂再灌注/缺血过程，能明显减轻复灌造成的心肌组织损伤。本研究采用冠状动脉结扎的方法[2]制备大鼠心肌缺血再灌注模型并观察缺血后处理对心肌细胞凋亡及凋亡相关酶活性的影响。

1 材料与方法

1.1 动物 清洁级雄性SD大鼠体质量(220±20)g，购于青龙山动物繁殖场。

1.2 试剂 原位末端标记法(TUNEL)染色试剂盒购自凯基生物科技发展有限公司；Caspase 3活性检测试剂盒、Caspase 9活性检测试剂盒购自碧云天生物技术研究所；总抗氧化能力(T-AOC)检测试剂盒、丙二醛(MDA)检测试剂盒购自南京南京建成生物工程研究所。

1.3 分组及模型制备 30只大鼠随机分为模型组、假手术组、缺血后处理组，每组10只。大鼠经戊巴比妥钠(30 mg/kg)ip 麻醉后连接小动物呼吸机进行人工呼吸。开胸暴露心脏，结扎冠状动脉左前降支40 min，以心电图显示 ST段明显抬高、T波高耸表示模型制备成功。再灌注2 h前给予5个循环的缺血/再灌注后处理(10s/10s)。假手术组只穿线不结扎。

1.3.1 HE染色 将各组大鼠心脏石蜡块切片、常规脱蜡至水，HE染色，光镜下观察心脏病理学变化。

1.3.2 TUNEL染色 心肌组织固定、石蜡包埋、切片后，按试剂盒说明书染色。光镜下观察，每张切片随机选择6个视野，计数凋亡阳性及阴性细胞数，计算凋亡率。……