周 娴,张恒嘉

(福建农林大学林学院，福建 福州 350002)

1 背景

目前，我国在农业和林业的发展上面临着严重的虫害危机。在农业方面，农业发展与粮食问题息息相关，早在1976年马世骏等人就统计出每年全世界的粮食由于病虫害影响损失了10%～15%[1]。而在林业方面，由于森林害虫适应力强、繁殖扩散速度快也给我国的森林资源造成了极大的损失。在2013年，国家林业和草原局统计得出全国森林虫害面积达到了847.46万hm2[2]。

我国对于农林虫害的防治手段主要方法有诱捕器诱捕[3]、化学农药施用[4]以及生物防治[5]等。其中，在对害虫的化学防治和生物防治的研究中，生物测定是对药效分析的关键试验环节，而可靠的生物测定方法对于研究具有重要的意义。因此，本篇文章将对目前现有的一些农林害虫室内生物测定体系进行总结概述，为今后农林害虫的防治研究提供基础与参考。

2 农林害虫生物测定方法

2.1 触杀式活性测定

触杀剂是指接触虫体后透过害虫体表使害虫中毒致死的药剂[6]。触杀式杀虫剂主要适用于刺吸式或舔吸式口器的害虫，包括对同翅目、半翅目、双翅目等在内的昆虫有杀虫活性。目前较为常见的触杀式生物测定方法包括：浸叶法、药膜法、滴虫法、浸虫法、Potter喷雾法等。

2.1.1 浸叶法 浸叶法是指，将试虫的食物浸入待测药液后晾干，试虫在取食过程中接触药液中毒，并在测定时间内对试虫的死亡情况进行统计的方法。目前，浸叶法较多应用于烟粉虱、稻纵卷叶螟、梨小食心虫等昆虫的生物测定环节。

何玉仙等人在使用烟粉虱成虫进行其对烟碱类杀虫剂抗性的实验中描述的浸叶生测法的主要方法为：将新鲜棉花打成小圆片，浸入稀释成不同浓度的药液，10S之后取出晾干，使用CO2对烟粉虱雌成虫进行短暂的麻醉，转移到培养皿中，48h后观察记录情况[7]。韦茂兔等人发明的1种针对烟粉虱成虫的毒力测定方法[8]、苏建亚等人公开发明的1种稻纵卷叶螟采集与生物测定方法[9]和庾琴等人的1种针对于梨小食心虫的初孵幼虫的毒力测定方法[10]中也用到了以上类似的方法。

2.1.2 药膜法 药膜法是将放置试虫的容器浸泡于待测药液中，使试虫与容器接触一定时间后致死的方法。中黑苜蓿盲蝽、蓟马等昆虫可以使用药膜法进行生物测定。

李国平等人测定杀虫剂对中黑苜蓿盲蝽的毒力时，将丙酮溶液转移到闪烁瓶中，热狗机上旋转使丙酮在室温下挥发，再将中黑苜蓿盲蝽成虫接入瓶中，使其充分接触，一段时间后测定死亡率[11]。孔祥义等人对蓟马进行5种药剂的室内毒力测定实验[12]和韩冬银等人测定9种杀虫剂对芒果蓟马的毒力实验[13]中也均采用了药膜法。

2.1.3 滴虫法 滴虫法是将待测药液滴到试虫的虫体上，一定时间后统计死亡率的方法。滴虫法可以在斜纹夜蛾、稻纵卷叶螟等昆虫的生物测定中使用。

武怀恒等人采用滴虫法测定农药对斜纹夜蛾幼虫的杀虫效果中，将供试农药原液使用超纯水稀释，并在斜纹夜蛾幼虫的前胸背板滴上药液，药液处理之后正常饲喂新鲜棉花，48h后记录试虫死亡数量[14]。苏建坤等人进行了稻纵卷叶螟抗药性测定及抗性监测实验[15]时也采用了上述方法。

2.1.4 浸虫法 浸虫法是将试虫直接浸入待测药液，培养一定时间并记录存活情况的方法。浸虫法可以用于螨虫、蚜虫、松材线虫、蚜虫等昆虫的生物测定环节。

孟和生在进行比较两种不同生物测定方法对杀螨剂毒力测定结果的影响时，将害螨的背部固定于粘贴有双面胶的玻片上，初步剔除死亡和不活泼的试虫，将带螨玻片浸入药液中，吸干多余药液，于生化培养箱中放置24h，统计死亡率[16]。蔡文欣等人在进行高效杀灭松材线虫药物配制的实验中采用了浸虫法：配制不同药液，挑取供试松材线虫到离心管中，加入药剂后置于恒温箱中静置，复苏后镜检，检测线虫的死亡数[17]。罗兰等人在对小麦蚜虫进行了杀虫剂的毒力测定[18]时也采用了类似方法。

2.1.5 Potter喷雾法 Potter喷雾法是将试虫先接到合适的带有食物的容器中，使用Potter喷雾塔喷施一定时间药剂，再培养一定时间并统计试虫死亡率的方法。目前，该方法可用于烟粉虱成虫的生物测定环节。

王泽华等人公开发明了一种烟粉虱成虫的室内测定方法。其步骤为：将塑料养虫盒的底部铺上一层1%琼脂，并将黄瓜叶片背面置于其上，接入烟粉虱成虫，保鲜膜封口并用解剖针扎数孔，之后置于-18℃冰箱内使试虫冻僵2～3min，并迅速将其置于Potter喷雾塔下，喷施药剂后重新封口，置于27℃恒温箱中饲养48h，观察并统计存活情况[19]。

2.2 胃毒式活性测定

胃毒剂是指药剂进入害虫体内，经胃肠道吸收使害虫中毒致死的药剂[6]。胃毒式杀虫剂适用于咀嚼式口器害虫，具有该口器的害虫较多是鞘翅目、鳞翅目、直翅目和膜翅目害虫。该生物测定方法中又以培养基混药法、叶片夹毒法为常见方法。

2.2.1 培养基混药法 培养基混药法是一种配制对应害虫的人工饲料，按照一定比例在饲料中添加毒素，并将带毒饲料直接饲喂试虫，达到生物测定目的的方法。其可用于甜菜夜蛾、绿盲蝽若虫等昆虫。

曾晓慧等人进行的苏云金芽孢杆菌对甜菜夜蛾幼虫的毒力测定中提及一种培养基混药法。其方法为：将稀释好的药液均匀混入人工饲料中，倒入24孔板，接入甜菜夜蛾初孵幼虫，一段时间后统计其死亡率[20]。梁革梅等人在发明专利中提及了有毒物质对绿盲蝽若虫的毒力测定方法：将待测药剂与人工饲料混合，并将其制成胶囊状，接入试虫，一定时间后统计并得到生物测定数据[21]。

2.2.2 叶片夹毒法 叶片夹毒法是将待测药剂加在一片叶片上，再用另一叶片覆盖，提供给试虫当食物，一定时间后统计其存活情况的方法。美国白蛾幼虫可以采用该方法进行生物测定。

范立鹏等人在进行紫茎泽兰乙醇提取物对美国白蛾幼虫的毒力测定中提及一种夹毒叶片法：使用打孔器将桑叶打成小圆叶片，将待测液使用微量点滴仪滴在叶片中央，待挥发，再将涂有浆糊的叶片覆盖于药面上制成夹毒的叶片，置于保湿培养皿中并接入试虫，喂食2h后，换成新鲜无毒桑叶，48h后统计试虫死亡情况并计算[22]。

2.3 内吸式活性测定

内吸剂指的是能够被植物的叶、茎、根或种子吸收，并输导至植物各部分组织内，植物汁液被害虫取食后，害虫中毒死亡的药剂。内吸式杀虫剂适用于防治具有刺吸式口器的害虫[6]，而刺吸式口器一般为同翅目、半翅目、蚤目、虱目和部分双翅目昆虫所有。目前较为常见的有叶片吸收法等。

叶片吸收法指的是将叶柄于药液中浸泡一定时间后取出，待叶柄吸收药液之后，取下相同大小的叶片并接入试虫进行的生物测定方法。烟粉虱成虫可以使用上述方法进行生物测定。何玉仙等人在使用烟粉虱成虫进行其对烟碱类杀虫剂抗性的实验中采用的内吸生测法的主要方法为：从棉花苗上摘下新鲜供试叶片，将叶柄浸入系列浓度药液，再用打孔器打下小圆片，正面朝下置于平铺有琼脂的培养皿中，使用CO2将烟粉虱的雌成虫进行短暂的麻醉，转移到培养皿中，置于培养箱中培养，48h后观察记录情况[7]。

3 展望

目前，农林害虫给我国的农业、林业已造成极大的经济损失，并且严重破坏了生态环境的稳定性，因此农林害虫的防治工作刻不容缓。当前，对于虫害的防治研究中需要同时考虑对虫害的抑制以及环境保护2个方面，即在稳定害虫数量的同时确保投放的药物不造成对其他生物和环境的危害，保证生态环境的可持续发展。因此，可靠有效的生物测定对于农林虫害的防治的研究具有重要的意义，而对于不同类型的农林虫害采取针对性的生物测定方法进行试验对于后续的田间应用具有现实意义。