陆建红， 黄晓文▲， 金益军， 杨彦楠， 吴奕征

(武警浙江省总队医院 1检验科， 2重症监护科， 浙江 嘉兴 314000；3浙江大学医学院附属邵逸夫医院骨科， 浙江 杭州 310016)

骨肉瘤好发于少年儿童，预后差，病死率高[1]。随着外科手术与新辅助化疗的联合应用，大多数患者实现了保肢[2]，但仍有远处转移和复发者，5年生存率无法超过70%[3]。此外，化疗药物及一些新型靶向药的使用,也增加了对患者的毒副作用[4]。因此，寻找新型有效的骨肉瘤治疗药物，提高远期缓解率，成为临床工作中亟待解决的问题之一。丹参酮IIA(tanshinone IIA)良好的抗氧化与抑制炎症反应的能力已被证实[5]，并能促进部分肿瘤细胞凋亡或自噬，诱导相关癌基因表达变化，进而抑制肿瘤生长[6-9]，但对人骨肉瘤细胞系HOS的作用，目前尚无相关文献报道。本研究应用CCK-8实验、集落形成实验、细胞迁移实验、荧光显微镜技术、电镜、蛋白质印迹法(Western blot)及流式细胞术等方法，探讨不同浓度丹参酮IIA对HOS细胞增殖的抑制作用及其相关机制，为进一步探究该药作为骨肉瘤治疗药物的可能性提供依据。

材 料 和 方 法

1 材料

丹参酮IIA(纯度>99%)和SP600125购自Sigma；CCK-8试剂盒、结晶紫染色液和Hoechst 33258染液购自江苏碧云天生物技术公司；Transwell细胞培养小室购自Corning；Annexin V-FITC/PI凋亡试剂盒购自BD；抗cleaved caspase-3、Bcl-2、Bax和p-JNK等抗体均购自Abcam。

2 细胞培养

人骨肉瘤细胞系HOS购自美国菌种保藏中心(American Type Culture Collection，ATCC),细胞培养于DMEM高糖培养液 (含10% 四季青胎牛血清、1×105U/L青霉素和100 mg/L链霉素)， 37 ℃、5% CO2孵箱内培养。

3 主要方法

3.1CCK-8实验检测细胞活力 取指数生长期HOS细胞，按每孔3 000个的细胞密度接种于96孔板，每孔补足DMEM高糖培养液至100 μL，增设只加培养液的阴性对照孔。待……