贺兴波， 郑弘毅， 杨建芬， 刘 瑶△， 任精华

(1赣南医学院第一附属医院， 2赣南医学院， 江西 赣州 341000； 3华中科技大学同济医学院附属协和医院肿瘤中心， 湖北 武汉 430022)

原发性肝细胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)是一种高度恶性的肿瘤，其典型特点是增殖速度快、侵袭性强，肿瘤血供往往不能满足生长所需, 由此使得肝癌细胞处于低氧和营养物质缺乏的应激微环境中[1]。充足的能量供应是肝癌细胞在此应激环境中无限增殖、浸润和转移的前提和必要条件[2]。线粒体是细胞的能量工厂，在线粒体自噬、分裂/融合和线粒体生物合成的协同作用下，限制和延缓功能受损线粒体的积累，可达到对线粒体的质量控制(mitochondrial quality control)[3]。高迁移率族蛋白B1(high mobility group box-1 protein，HMGB1)是一种非组蛋白DNA结合蛋白，除了通过调控细胞周期、促进肿瘤新生血管生成和肿瘤转移参与肝癌发病外，还可诱导线粒体自噬[4]，调节肿瘤能量代谢，参与肝癌发病。我们采用RNA干扰技术下调肝癌细胞HMGB1的表达，观察缺氧环境下细胞线粒体功能的变化并从线粒体生物合成角度探讨其可能的机制，为阐明HMGB1如何调控肝癌生长提供一个新视点。

材 料 和 方 法

1 细胞株

人肝癌HepG2细胞购自ATCC，传代并液氮保存于赣南医学院第一附属医院临床医学研究中心。

2 主要试剂和仪器

RPMI-1640培养液和胎牛血清(Gibco)；Lipofectamine®2000(Invitrogen)；HMGB1小干扰RNA(HMGB1 small interfering RNA,HMGB1-siRNA)及阴性对照siRNA(negative control siRNA, siRNA-NC; Cat#stQ0002758-1)(锐博生物科技有限公司)；MitoSOXTMRed Mitochondrial Superoxide Indicator(Thermo Fisher Scientific)；增强型ATP检测试剂盒(Cat#S0027)、线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1; Cat# C2006)和基因组DNA小量抽提试剂盒(Cat#D0063)(碧云天生物技术研究所)；抗过氧化物酶体增殖物激活……