马 妮，高明菊，刘云芝，王炳艳，朱 艳，冯光泉

（1.文山学院 三七研究院，云南 文山 663099，2.云南省三七工程技术研究中心，云南 文山 663099）

三七为五加科人参属植物，是中国云南特有的名贵中药材，对心脑血管系统疾病具有显著疗效，为文山州最具特色的优势生物资源[1]。云南文山是三七的原产地和主产区，也是道地产区，由于受三七连作障碍的影响，以及三七知名度提高、市场需求不断扩大，三七已扩展到除云南省文山州以外的红河州、昆明市、曲靖市、玉溪市、大理州、楚雄州、临沧市以及广西省百色市进行种植，但其质量状况不甚清楚，为了解三七质量现状，项目组全面开展了三七质量现状的调查工作。在同一年度的三七采收期10月至12月，对三七主要种植区域的云南省文山州、红河州、曲靖市、昆明市、玉溪市、大理州、楚雄州、临沧市以及广西省百色市等2省9地州36县（市）76乡（镇）的87个三年生三七种植园进行三七样品的采集，进行三七质量现状调查与评价。皂苷成分是三七的主要成分，主要为人参皂苷 Rb1、Rb2、Rd、Re、Rg1、Rg2、Rh1和三七皂苷R1、R2、R3、R4、R6以及七叶胆皂苷XVII等，其中以Rg1、Rb1含量最高[2-4]，2015版中国药典中，三七药材以三七皂苷 R1、人参皂苷Rg1及人参皂苷Rb1为含量评价指标[5]，曾有文献报道测定三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、Rb1、Rd等4个皂苷成分评价三七质量[6]，未见同时以三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、Re、Rb1、Rd等5个指标进行三七药材质量评价的。为更加全面了解各产区三七质量现状，项目组对不同产区三七进行了5个皂苷成分的测定，并进行评价。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Agilent1260液相色谱仪（美国安捷伦），Sartorius CPA225D电子分析天平（德国赛多利斯）。

1.2 试药

三七总皂苷对照品购自中国药品生物制品检定所（供含量测定用，批号：110870-201302，含量以三七皂苷R16.9%，人参皂苷Rg128.0%，人参皂苷Re 3.8%，人参皂苷Rb129.7%，人参皂苷Rd 7.3%计）。

1.3 样品

样品由项目组于同一采收期内采集三年生三七，采挖后进行清洗、拣选、去除支根和剪口，干燥，取主根部分粉碎后用于检测。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以水为流动相B，检测波长为203 nm；理论板数按三七皂苷R1峰计算应不低于4 000；梯度洗脱条件见表1。

表1 HPLC梯度洗脱条件

2.2 对照品溶液的制备

精密称取三七总皂苷对照品适量，加甲醇制成每1 mL含三七皂苷R10.1 mg、人参皂苷Rg10.4 mg、人参皂苷Re 0.05 mg、人参皂苷Rb10.4 mg、人参皂苷Rd 0.1 mg的混合溶液，即得。

2.3 供试品溶液的制备

取三七样品粉末（过四号筛）0.6 g，精密称定，精密加入甲醇50 mL，称定重量，放置过夜，置80℃水浴上保持微沸2 h，放至室温，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.4 线性关系的考察

精密吸取0.25、0.5、1.0、1.5、2.5 mL已配制好的对照品溶液于5 mL容量瓶中，配制得一系列浓度的标准品溶液，分别按上述色谱条件测定，以标准品浓度（mg/mL）为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线，得线性回归方程，在各自的线性范围内浓度与峰面积呈良好的线性关系。

2.5 精密度实验

取同一份供试品溶液，按上述色谱条件，连续进样6次，三七皂苷R1，人参皂苷Rg1，人参皂苷Re，人参皂苷Rb1和人参皂苷Rd的RSD值分别为0.44%、0.10%、0.35%、0.24%、0.28%。

2.6 稳定性实验

取同一份样品溶液，放置0、2、4、8、12 h，按上述色谱条件，分别测定峰面积积分值，三七皂苷R1，人参皂苷Rg1，人参皂苷Re，人参皂苷Rb1和人参皂苷Rd的RSD值分别为0.54%、0.11%、0.40%、0.22%、0.34%，结果表明本供试品溶液在12 h内基本稳定。

2.7 重复性实验

精密称取同一地块的三七样品粉末6份，按上述方法试验，分别测定样品中三七皂苷R1，人参皂苷Rg1，人参皂苷Re，人参皂苷Rb1和人参皂苷Rd的含量，RSD值分别为0.61%、1.32%、1.93%、1.34%，2.01%，表明本方法重现性良好。

2.8 加样回收率实验

取已知含量的同一地块的三七样品粉末，精密称取6份，分别精密吸取已知浓度的标准品混合溶液各1.5 mL加入样品中，按上述方法实验，分别测定样品中三七皂苷R1，人参皂苷Rg1，人参皂苷Re，人参皂苷Rb1和人参皂苷Rd的含量，结果平均回收率分别为102.88%、98.2%、97.56%、101.68%、100.65%，RSD值分别为2.93%、2.39%、2.63%、1.53%、2.12%（n = 6），表明本测定方法可靠。

2.9 样品的测定

分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，测定，即得，结果按干燥品计算。结果见表1。

表1 不同地区87个三七样品三七皂苷含量测定结果/%

续表1：

续表1：

3 结果分析

项目组将所采集的样品按不同地州（注：云南省楚雄州、临沧地区由于所采集的样品数太少，不参与评价）进行归类，分别统计各地州所采集三七样品中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd、R1+ Rg1+ Rb1及R1+Rg1+ Re+Rb1+Rd含量的最大值、最小值，并计算得其平均值。结果见表2、3。

表2 各地州三七样品中5个单体皂苷含量比较/%

表3 各地州三七样品中R1+ Rg1+ Rb1和R1+ Rg1+ Re+Rb1+Rd含量比较/%

3.1 各单体皂苷含量比较

以三七皂苷R1含量的平均值进行比较，最高的是红河州为1.3%，最低的是百色市为0.91%。按照由高到低排列，红河州＞昆明市＞保山市＞玉溪市＞曲靖市＞文山州＞百色市。

以人参皂苷Rg1含量平均值进行比较，最高的是文山州为5.03%，最低的是昆明市为4.27%。按照由高到低排列，文山州＞曲靖市＞玉溪市＞百色市＞红河州＞保山市＞昆明市。

以人参皂苷Rb1含量平均值进行比较，最高的是百色市为4.66%，最低的是保山市为3.68%。按照由高到低排列，即百色市＞文山州＞玉溪市＞红河州＞曲靖市＞昆明市＞保山市。

以人参皂苷 Re含量平均值进行比较，最高的是百色市为0.86%，最低的是昆明市和保山市，同为0.51%。按照由高到低排列，即百色市＞文山州＞红河州＞曲靖市＞玉溪市＞昆明市＞保山市。

以人参皂苷Rd含量平均值进行比较，最高的是百色市为1.10%，最低的是保山市为0.89%。按照由高到低排列，即百色市＞文山州＞玉溪市＞红河州＞曲靖市＞昆明市＞保山市。

3.2 “R1+ Rg1+ Rb1”3个单体皂苷含量比较

以“三七皂苷R1+人参皂苷Rg1+人参皂苷Rb1”3个单体皂苷含量总和的平均值进行比较，最高的是文山州为10.66%，最低的是保山市为9.18%。按照由高到低排列，即文山州＞百色市＞玉溪市＞红河州＞曲靖市＞昆明市＞保山市。

3.3 “R1+ Rg1+ Re+Rb1+Rd”5个单体皂苷含量比较：

以“R1+ Rg1+ Re+Rb1+Rd”5个单体皂苷含量总和的平均值进行比较，最高的是文山州为12.44%，最低的是保山市为10.58%。按照由高到低排列，即文山州＞百色市＞玉溪市＞红河州＞曲靖市＞昆明市＞保山市。

4 小结

各主产区三七样品中，三七皂苷R1含量以云南省红河州的三七为最高；人参皂苷Rg1含量以云南省文山州的三七为最高；而人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、人参皂苷Rd等3个单体皂苷含量以广西省百色市的三七为最高；3个单体皂苷（R1+ Rg1+Rb1）和5个单体皂苷（R1+ Rg1+ Re+Rb1+Rd）含量总和以云南省文山州的三七为最高，说明云南省文山州的三七中总皂苷含量最高，其余依次为：百色市、玉溪市、红河州、曲靖市、昆明市、保山市等。