蒋凯 严发展 丁秦超 陈鑫珉 梁文星 丁滨

摘 要：目的 比较几种蛇蜕水解方法的水解效率，并以HaCaT细胞评价水解产物的生物活性。方法 利用乙酸、NaOH、氧化还原两步法在不同温度和时间条件下水解蛇蜕；利用茚三酮法、考马斯亮蓝法检测水解产物中氨基酸及多肽的含量；用HPLC测定提水解产物分子量；利用HaCaT评价水解产物的生物活性。结果 酸水解的最适条件为80℃、2.5mol/L乙酸反应6h；碱水解的最适条件为80℃、0.625mol/L NaOH反应6h；氧化还原水解法最适试剂浓度分别为6%过硫酸氢钾、4mol/L尿素、1.25%亚硫酸氢钠；通过上述方法获得的胶原蛋白多肽分子量约为1kDa。该多肽能够促进细胞体外增殖。

关键词：蛇蜕；多肽；水解；生物活性

中图分类号：R932 文献标志码：A 文章编号：2095-2945（2018）29-0032-03

Abstract： Objective： The hydrolytic efficiency of several snake slough hydrolysis methods was contrastively studied， and bioactivity of the hydrolysate was evaluated with HaCaT. Methods： The snake slough was hydrolyzed by acetic acid， NaOH and two-step redox methods at different temperatures and time. The contents of amino acids and peptides in the hydrolysates were determined by ninhydrin and coomassie brilliant blue methods， respectively. The molecular weight of hydrolyzed products was determined by HPLC. The HaCaT was used to evaluate the biological activity of the hydrolysate. Results： The optimal conditions of acidic or alkalic hydrolysis methods were as follows： 2.5 mol/L acetic acid at 80°C for 6 h， 0. 625 mol/L NaOH at 80°C for 6 h. And the optimum reagents for redox hydrolysis was 6% potassium persulfate， 4 mol/L urea assemble 1.25% sodium bisulfite. The molecular mass of the hydrolysate was about 1 kDa. The hydrolysate could promote the cell proliferation in vitro.

Keywords： snake slough； polypeptide； hydrolysis； biological activity

蛇蜕[1]是游蛇科动物的干燥表皮膜，有龙子衣、蛇符、龙衣之称。性咸、甘、平，入肝、脾经，具有祛风、解毒、定惊、退翳的功能，富含无机盐、氨基酸、胶原蛋白等成分，可通过水解获得。胶原蛋白因其较好的物理性能和生物学特性，广泛用于医疗器械、食品添加、化妆品生产等领域[2-4]。目前国内外学者就胶原蛋白生物材料的构建已开展了大量工作[5-6]，其中主要集中在哺乳动物和水生动物来源的胶原蛋白上，而爬行动物来源的胶原蛋白开发研究尚不完善。本研究比较了几种不同水解蛇蜕的方法，并初步判断水解产物的分子量大小，验证了水解产物的生物活性。为蛇蜕水解产物的开发和应用提供了实验方法。

1 材料与方法

1.1 材料

本实验中的化学及生化试剂均购自华东医药（上海）有限公司。……