李春磊 裴艳志 邹志田 高磊 路通 凡航 朱晓峰

摘 要：目的 研究CCR7在NSCLC中的表达情况，探讨其与NSCLC的临床病理关系。方法 采取链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶免疫组化法检测36例非小细胞肺癌组织、5例正常肺组织 CCR7的表达情况及肺癌组织 D2-40的表达情况。结果 CCR7主要表达在细胞膜及细胞质，36例组织标本中29例阳性表达，阳性率为80.56%；正常肺组织的阳性率为10.00%。癌组织淋巴结阳性标本中 CCR7阳性率为84.21%，阴性标本阳性率为52.94%（P<0.05）。结论 CCR7在肺癌组织中高表达，并随着TNM分期的提高，CCR7的表达也逐渐提高。并且CCR7高表达的癌组织样本中D2-40也呈现高表达。NSCLC淋巴结转移与癌组织中的CC7高表达关联密切，可能为今后预测NSCLC患者预后及治疗提供有力的理论依据。

关键词：非小细胞肺癌；CCR7；淋巴结转移

中图分类号：R734.2 文献标识码：A DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2018.17.004

文章编号：1006-1959（2018）17-0014-03

Abstract：Objective To investigate the expression of CCR7 in NSCLC and to explore its clinicopathological relationship with NSCLC. Methods The expression of CCR7 in 36 cases of non-small cell lung cancer tissues and 5 normal lung tissues and the expression of D2-40 in lung cancer tissues were detected by streptomycin avidin-peroxidase immunohistochemistry.Results CCR7 was mainly expressed in cell membrane and cytoplasm，and 29 cases were positively expressed in 36 tissue samples，the positive rate was 80.56%； the positive rate of normal lung tissue was 10.00%.The positive rate of CCR7 in cancer tissue-positive specimens was 84.21%，and the positive rate in negative specimens was 52.94%（P<0.05）.Conclusion CCR7 is highly expressed in lung cancer tissues，and the expression of CCR7 is gradually increased with the increase of TNM staging.And D2-40 also showed high expression in cancer tissue samples with high CCR7 expression.NSCLC lymph node metastasis is closely related to the high expression of CC7 in cancer tissues， which may provide a powerful theoretical basis for predicting the prognosis and treatment of patients with NSCLC.

Key words：Non-small cell lung cancer；CCR7；Lymph node metastasis

肺癌（lung cancer）发生于支气管黏膜及其腺体上皮的恶性肿瘤，是当今全世界威胁人类健康的最严重的恶性疾病之一，且其发病率呈逐年上升的趋势，现已位居恶性肿瘤发病率和死亡率之首，其中80%以上是非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer， NSCLC）[1]。现阶段的治疗方法以手术为主，放化疗等多学科综合治疗已成为学科共识。虽然目前在肺癌早期诊断及综合治疗方面取得了相当大的进展，但目前的5年生存期仍未达到令人满意的程度，即便是Ⅰ期的NSCLC患者根治术后，仍会有相当一部分患者发生肿瘤的复发和远处转移，这提示着我们这些患者术前即有可能存在着一些转移，而淋巴结转移最常见的途径，所以肺癌的淋巴结转移是临床治疗所面对的最大难题，直接影响着患者的生存期。趋化因子受体7（Chemokine receptor 7，CCR7）是一种G蛋白偶联的7次跨膜受体，在与配体相结合，可实现肿瘤细胞与淋巴细胞归巢类似的生物学行为，进而介导肿瘤细胞向特定器官的转移。现已发现，CCR7在多种实体肿瘤中高表达，如胰腺癌、乳腺癌、横纹肌肉瘤等，影响着肿瘤细胞的粘附、存活、淋巴管、血管生成等，在肿瘤的侵袭转移中发挥重要作用。本实验研究CCR7在NSCLC组织中表达情况及其临床病理的关系进行分析。

1资料与方法

1.1 一般资料 NSCLC组织蜡块来自佳木斯大学附属第一医院胸外科从2010年1月～2015年12月行手术切除的肺癌组织，并选取5例手术切除的正常肺组织，按照《中国肿瘤病理学分类》，36例标本中鳞癌15例，腺癌19例，腺鳞癌2例。淋巴结转移19例；年龄48～75岁，中位年龄60岁。所入选患者手术前均未行放疗或化疗治疗。36例患者按照国际抗癌协会（ UICC）2009年新修订的第七版非小细胞肺癌 TNM分期分为：Ⅰ期8例、Ⅱ期15例、Ⅲ期13例。所有切片經过10%中性福尔马林溶液浸泡固定，并常规石蜡包埋，4 μm连续切片，免疫组织化学SP法染色。

1.2 主要試剂 鼠抗人CCR7购买自哈尔滨博士德生物科技有限公司。检测系统DAB显示试剂盒购买于北京中杉金桥生物科技有限公司。

1.3 实验方法 所有标本均经过柠檬酸缓冲液（pH=6.0）高温高压抗原修复，采用链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶免疫组化法（SP法）免疫组织化学法染色。 严格按照试剂盒操作进行。CCR7稀释浓度为1： 100。用已知的CCR7阳性切片作CCR7的阳性对照。PBS取代一抗作阴性对照。所有切片采用DAB显色，苏木精复染，中性树脂封片，光镜下观察。

1.4结果判定 按照Andre等[2]的方法对CCR7的结果进行判读，由两位资深病理医师双盲阅片，根据免疫组织化学染色阳性的细胞比例和染色的强度进行评分，以细胞膜或细胞浆呈棕黄色颗粒为阳性细胞。染色强度判：无色记为0分；浅黄色记为1分；棕黄色记为2分；棕褐色记为3分；根据着色细胞比例评分：≤10%记为0分； 11%～25%记为1分； 26%～50%记为2分； <50%记为3分。两者评分之和≥3分记为阳性，<3分记为阴性。

1.5统计学方法 本次研究数据采用SPSS21.0统计软件进行分析，计数资料以（%）表示，行？字2检验，P<0.05表示差异具有统计学意义。

2结果

随着TNM分期的提高，其阳性率也逐渐提高。正常肺组织多为染色阴性或浅黄色，染色的面积小，见图1。CCR7在NSCLC中高表达，且表达主要在细胞膜和（或）细胞质中，见图2。36例NSCLC组织有80.56%的标本阳性表达，正常肺组织为10.00%（P<0.05）。同时，本实验还发现CCR7的表达与患者的年龄、性别、肿瘤大小、病理类型无关，而与淋巴结是否转移、肿瘤的TNM分期相关，见表1。

3讨论

肿瘤转移和侵袭是人类癌症的关键恶性特征。肿瘤患者的死亡主要是由癌细胞扩散到远处的器官造成。癌症转移的重要特征之一就是淋巴结受累。目前肿瘤新生淋巴管及新生血管的研究已成为研究肿瘤转移的热点。CCR7在肿瘤淋巴管和血管的生成中起到重要作用。CCR7在所有原始T细胞和一些记忆T细胞，B细胞和成熟树突状细胞上表达。在免疫和炎症反应期间，CCR7与其配体趋化因子配体19（CCL19）或趋化因子配体21（CCL21）相互作用时，可促进淋巴细胞运输和归巢到淋巴结[3-5]。相关文献报道[6]CCR7可与其配体 CCL19/CCL21相结合，在多种生长因子，如VEGF-C、D等的参与下，可趋化肿瘤向淋巴结转移。

D2-40是近年来发现的一种淋巴管标志物，可与癌胚抗原M2A特异性结合，且只与淋巴管内皮反应，不与血管内皮反应，被认为是最具有特异性的淋巴管标志物[7]。相关研究显示[8] D2-40抗体可更敏感的检测出肿瘤淋巴管的生成，可更有效的预测肿瘤的淋巴结转移。

本实验发现：①CCR7在NSCLC组织中的表达显著高于正常组织，且随着TNM分期的提高，NSCLC组织CCR7的阳性率逐渐提高；②淋巴结阳性的NSCLC的CCR7的表达率高于淋巴结阴性的标本；③淋巴结阳性组的MLVD高于淋巴结阴性组MLVD；④CCR7在不同病理类型的NSCLC表达，差异无临床意义及统计学意义。

本实验采用SP法证实了CCR7与NSCLC淋巴结的转移高度相关。相关研究[9-11]证明 CCR7可与其配体结合，形成CCR7/CCL19/CCL21系统，通过ERK/Akt通路诱导VEGF-C、D的上调，从而促进肿瘤微淋巴管生成，为NSCLC淋巴结转移打下伏笔。并且该实验测定D2-40发现淋巴结阳性的组织MLVD的表达率明显高于淋巴结阴性的标本，从侧面印证CCR7与NSCLC淋巴结转移密切相关。

综上所述，CCR7高表达与NSCLC淋巴结的转移关系密切，可能为今后NSCLC患者的治疗及预测预后提供有力的理论依据。积极寻找阻断CCR7作用通路的靶点，将成为未来研究NSCLC淋巴管生成和淋巴结转移新的方向。

参考文献：

[1]Jemal A，Bray F，Center MM，et al.Global cancer statistics[J].Ca A Cancer Journal for Clinicians，2015，65（2）：87-108.

[2]Andre F，Cabioglu N，Assi H，et al.Expression of chemokine receptors predicts the site of metastatic relapse in patients with axillary node positive primary breast cancer[J].Annals of Oncology Official Journal of the European Society for Medical Oncology，2006，17（6）：945.

[3]Chiara LD，Crean J.Emerging Transcriptional Mechanisms in the Regulation of Epithelial to Mesenchymal Transition and Cellular Plasticity in the Kidney[J].Journal of Clinical Medicine， 2016，5（1）：6.

[4]Mitsugu F，Takaaki M，Akihiko I.Biomedical insights into cell adhesion and migration-from a viewpoint of central nervous system tumor immunology[J].Frontiers in Cell&Developmental; Biology，2015，3（3）：55.

[5]Nowruz D，Ehsan S，Parva P，et al.Comparison The Effects of Two Monocyte Isolation Methods，Plastic Adherence and Magnetic Activated Cell Sorting Methods，on Phagocytic Activity of Generated Dendritic Cells[J].Cell Journal，2013，15（3）：218-223.

[6]蔡慶勇.CCR7基因对食管鳞状细胞癌新生血管的作用及机制研究[D].第三军医大学，2016.

[7]张春芳，齐冬雪，杨聪颖，等.SALL4、D2-40和 Glypican-3在睾丸生殖细胞肿瘤诊断中的应用[J].临床与实验病理学杂志，2015（8）：850-854.

[8]高强，丁贵坡，张旋.乳腺癌组织中D2-40标记的淋巴管浸润与淋巴结转移的关系[J].中国实用医刊，2014，41（6）：19-21.

[9]杨润祥，刘林，马飞，等.甲状腺癌中CCR7和D2-40的表达及其与淋巴结转移的关系[J].肿瘤防治研究，2014，41（5）：418-422..

[10]Zhang YY，Liu ZB，Ye XG，et al.Iodine regulates G2M progression induced by CCL21 CCR7 interaction in primary cultures of papillary thyroid cancer cells with RET PTC expression[J].Molecular Medicine Reports，2016，14（4）：3941-3946.

[11]Irino T，Takeuchi H，Matsuda S，et al.CC-Chemokine receptor CCR7：a key molecule for lymph node metastasis in esophageal squamous cell carcinoma[J].Bmc Cancer，2014，14（1）：291.

收稿日期：2018-3-12；修回日期：2018-4-11

编辑/李桦