李永才

摘要：采用二羟基乙酸盐比色法测定饲料中色氨酸的含量。测得色氨酸的RSD为1.89%～3.23%，平均回收率为92.50%～93.40%。该方法所需仪器简单，操作方便，灵敏度较高，测定结果准确，可用于饲料中色氨酸含量的测定。

关键词：二羟基乙酸盐；比色法；色氨酸；饲料

中图分类号：S816.17 文献标识码：A 文章编号：1674-1161（2018）04-0043-02

饲料中的色氨酸是动物维持生命和生长所必需的氨基酸，其含量被用作评价饲料营养品质的重要指标。目前主要采用氨基酸自动分析仪、高效液相色谱、离子交换层析、荧光等方法测定饲料中色氨酸的含量，但上述方法均存在仪器价格昂贵的问题，使其应用受到一定限制。而比色法所需仪器简单、价格便宜，便于普及推广。

1 材料与方法

1.1 原理

在浓硫酸存在下，三价铁离子可将乙酸氧化成二羟基乙酸，二羟基乙酸又与经木瓜蛋白酶水解后从蛋白质中解离出来的色氨酸的吲哚环反应，生成红紫色化合物，其颜色深浅与色氨酸的含量成正比。

1.2 仪器

日立U-3010紫外分光光度计：日本日立公司。

1.3 试剂

1.3.1 0.1 mol/L HAC—NaAC缓冲液（pH 7.0） 将0.1 mol/L HAC与NaAC溶液按1∶178混合。

1.3.2 木瓜酶水解液 称取400 mg木瓜蛋白酶，放入小研钵中，加少量0.1 mol/L HAC—NaAC缓冲液，充分研磨使其呈匀浆状，转移到100 mL容量瓶中，用HAC—NaAC缓冲溶液冲洗研钵并倒入容量瓶中，最后用HAC—NaAC缓冲液稀释至刻度。

1.3.3 混合显色液 将0.03%氯化铁乙酸液与15 mol/L硫酸液于使用前1～2 h等体积混合。

1.3.4 色氨酸标准贮备液 准确称取20 mg DL-色氨酸（经105 ℃恒重），加几滴0.1 mol/L氢氧化钠及少量水溶解后，定量转移到200 mL容量瓶中，加水至刻度，混匀，贮于冰箱中。……