刘议蔧，唐善虎*，成桂红，罗 玥，杜 钢，伍雯雯，肖 琳

（1.西南民族大学 生命科学与技术学院，四川 成都 610000；2.四川省食品药品检验检测院，四川 成都 610000）

白酒是中国特有的一种蒸馏酒，据《本草纲目》记载：“烧酒非古法也，自元时创始，其法用浓酒和糟入甑，蒸令气上，用器承滴露”[1]。白酒的香味成分有醇类、酯类、酸类、醛酮类化合物、缩醛类化合物、芳香族化合物、含氮类化合物和呋喃类化合物等[2]。醇类除乙醇外，最主要的是异戊醇、异丁醇和正丙醇，属于醇甜和助香剂的主要物质来源，对形成酒的风味和促使酒体丰满、浓厚起着重要的作用；酯类是形成酒体香气浓郁的主要因素，酸类影响白酒的口感和后味，是影响口味的主要因素。白酒以曲类、酒母为糖化发酵剂，利用淀粉质原料，经蒸煮、糖化、发酵、蒸馏、陈酿和勾兑酿制而成[3]。目前白酒市场繁荣，但不法商家试图添加甜味剂，改善劣质白酒的口感[4]。严重损害了白酒消费者及生产者的利益，并给白酒监管带来了困难[5]。

爱德万甜化学名为N-{N-[3-（3-羟基-4-甲氧基苯基）丙基]-L-a-天冬氨酰}-L-苯丙氨酸-1-甲酯，分子式为C24H30N2O7·H2O，其化学结构与纽甜相似[6-7]。由香兰素和阿斯巴甜经化学反应制得，是一种20 000倍甜度的超高倍甜味剂。根据欧盟专家组对艾德万甜的稳定性、降解产物、毒性及暴露风险的评估，认为其每日允许摄入量（acceptable daily intake，ADI）为5 mg/（kg·bw·d）[8]。目前，在国外艾德万甜被广泛应用于食品、饮料和药品中。2017年10月30日中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会2017年第8号公告规定，对新增的食品添加剂爱德万甜作为甜味剂，规定了其使用的食品范围和具体用量，其中白酒不得添加[9]。目前，我国尚未制订爱德万甜的食品安全检测国家标准，相关资料和文献非常少，这给监管及企业自控工作带来了不便。目前，国内外关于甜味剂（如安赛蜜、糖精钠、甜蜜素和阿斯巴甜等）的研究较多，阿斯巴甜、糖精、安赛蜜、纽甜和三氯蔗糖都是美国食药局（food and drug administration，FDA）批准的人造甜味剂[10]。分析方法有高效液相色谱（high performance liquid chromatography，HPLC）法、液相色谱-串联质谱法、气相色谱（gas chromatography，GC）法、离子色谱（ion chromatography，IC）法[11-14]等，关于爱德万甜检测方法的报道非常少。因此，有必要建立白酒中爱德万甜及其他多种甜味剂的同时测定的检测方法，以期为快速、准确测定白酒中新型甜味剂和常用甜味剂提供技术支撑，促进白酒行业安全健康发展[1]。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

白酒样品：市售；乙酸铵（分析纯）：天津市科密欧化学试剂有限公司；超纯水（电导率为18.2 MΩ）：Milli-Q超纯水机制备；安赛蜜标准品（质量浓度1.00 mg/mL）：北京海岸鸿蒙标准物质技术有限责任公司；糖精钠标准品（质量浓度1.00 mg/mL）：中国计量科学研究院；阿斯巴甜标准品（纯度97.2%）：Dr.Ehrenstorfer GmbH公司；阿力甜标准品（纯度83.5%）：美国Chromadex公司；乙腈（色谱纯）、爱德万甜标准品（纯度99.1%）：美国Sigma公司；纽甜标准品（纯度95.1%）：上海安谱科学仪器有限公司。

1.2 仪器与设备

1260高效液相色谱仪，配二极管阵列检测器（diodearray detector，DAD）：美国安捷伦公司；Milli-Q超纯水机：密理博中国有限公司；XS105电子天平：瑞士Mettler Toledo集团；吉尔森移液器（100～5 000μL）：法国Gilson公司。

1.3 方法

1.3.1 标准溶液的配制

将阿斯巴甜、阿力甜分别配制成1.00 mg/mL的标准储备液，爱德万甜、纽甜分别配制成200μg/mL的标准储备液，4℃避光冷藏。然后配制成质量浓度梯度为0.1μg/mL、0.5 μg/mL、1.0 μg/mL、2.0 μg/mL、5.0 μg/mL、10.0 μg/mL、20.0μg/mL、50.0μg/mL的标准系列溶液。

1.3.2 样品前处理方法

精确称取白酒样品10g（精确至1mg）于蒸发皿中，70℃水浴烘干，放至室温，加2 mL水复溶，超声处理，过0.22μm水相滤膜，待测。用纯水作空白，依次对标准使用液各浓度梯度、空白、加标回收液、样液进行测定。

1.3.3 测定条件优化

（1）色谱条件：WATERST3色谱柱（4.6 mm×150 mm，5μm）；流动相为20mmol/L的乙酸铵和乙腈，流速1.0mL/min；检测波长分别为200nm、218nm、230nm、280nm；柱温30℃；进样量20μL。梯度洗脱方式见表1[16-18]。

（2）测定条件：根据色谱条件，分别考察不同的流动相（甲醇、乙腈）、流动相的比例、采集波长、烘干温度对测定结果的影响。

表1 梯度洗脱方式Table 1 Modes of gradient elution

2 结果与分析

2.1 流动相的选择

按照1.3.3的色谱条件，6种甜味剂混标多通道共同测定高效液相色谱图见图1，白酒样品甜味剂分析高效液相色谱图见图2。

图1 6种甜味剂标品的高效液相色谱多通道共同测定色谱图Fig.1 Chromatogram of 6 kinds of sweeteners standards simultaneously detected by HPLC with multiple channels

图2 白酒样品的高效液相色谱图Fig.2 HPLC chromatograms of Baijiu samples

由图1、图2可知，该方法在22 min内可完成6种甜味剂的共同检测，且6种甜味剂混标和白酒样品中各组分分离度好，相互无干扰。

2.2 线性回归分析

标准品线性范围、相关系数、检出限及定量限结果见表2。

表2 6种标准品线性范围、回归方程、检出限和定量限Table 2 Linear ranges,regression equations,detection limits and quantitation limits of 6 kinds of standards

由表2可知，6种甜味剂标准品线性范围为0.1～50.0μg/mL，回归方程相关系数R2均＞0.999。表明6种甜味剂均有良好的线性关系，爱德万甜、纽甜、安赛蜜、糖精钠检出限为0.02 mg/kg，阿斯巴甜、阿力甜检出限为0.2 mg/kg，均低于国家标准的检出限。

2.3 精密度实验

取阴性样品加标准品，按照1.3.2操作步骤进行处理，上机质量浓度为10μg/mL，进行精密度考察（平行实验6次），结果见表3。

表3 各组分的精密度结果Table 3 Results of precision of each component

由表3可知，6种甜味剂相对标准偏差（relativestandarddeviation，RSD）均＜0.5%，精密度符合GB/T 27404—2008《实验室质量控制规范食品理化检测》的技术要求＜7.5%。

2.4 回收率实验

选择加标质量浓度2.0μg/mL、10.0μg/mL两个不同水平对阴性样品进行加标实验，考察方法的准确度，结果见表4。

表4 两种方法加标回收率结果Table 4 Results of adding standard recovery of two methods

续表

由表4可知，方法的加标回收率为98.35%～105.25%，RSD＜0.5%，表明该方法准确度良好。

3 结论

爱德万甜作为新型甜味剂，本实验通过高效液相色谱法多通道采集对新型甜味剂爱德万甜及其他5种常用甜味剂分别从条件优化到方法学验证比较，结果表明，各项指标均能满足实验室要求。线性范围为0.1～50.0μg/mL，线性相关系数R2均＞0.999。爱德万甜、纽甜、安赛蜜、糖精钠检出限均为0.02 mg/kg，阿斯巴甜、阿力甜检出限均为0.2 mg/kg，加标回收率为98.35%～105.25%，相对标准偏差＜0.5%。前处理过程简单，损失少，干扰小，简单快速，精密度高，灵敏度高。