米诺环素多克隆抗体的制备
2018-12-06郭德超,郑凤娥,杜翠荣等
食品安全导刊 2018年32期
关键词:检测
米诺环素又称二甲胺四环素、美满霉素、美诺星、康尼Minocycline、Minomycin、Klinomycin等,是一种高效、速效、长效的新半合成四环素类抗生素,其抗菌作用为该属中最强,抗菌谱与多西环素相似,作用较四环素强2~4倍,也胜过多西环素、美他环素、土霉素。目前国内外有关米诺环素的检测方法主要有高效液相色谱法(HPLC)薄层色谱法(TLC)以及毛细管电泳法(CE),这些方法虽然检测结果准确、灵敏度高,但是待测样品前处理过程复杂、费时。免疫学方法基于抗原、抗体之间的特异反应,具有快速、灵敏、特异性强、操作简单等特点,是残留检测的有效方法,不仅适用于大量样品的快速筛选,某些情况下也可以用于确证性检测。
米诺环素为小分子化合物,本身不具有免疫原性,运用免疫学方法进行检测首先应将其与大分子蛋白质载体进行偶联,产生所需的免疫原性。本文应用戊二醛法和重氮化法将米诺环素在适当的条件下与牛血清白蛋白(BSA)进行偶联,合成了MNC完全抗原MNC-BSA,免疫动物后制成多克隆抗体,旨在为米诺环素残留免疫学快速检测方法的建立奠定基础。
材料与方法
材料
米诺环素由中国药品生物制品检定所提供;新西兰大白兔由沈阳市盛京医院提供。
试剂与仪器
弗氏完全佐剂(CFA)、弗氏不完全佐剂(IFA) sigma公司;牛血清白蛋白(BSA) 北京奥博星生物技术有限公司;戊二醛(GA)、考马斯亮兰G250、甲醇钠-甲醇溶液均为分析纯。
Model 68酶标仪 Bio—Rad公司;TU-1810紫外可见分光光度计 北京普析通用仪器有限责任公司;RET BASIC磁力搅拌器 德国IKA公司;……
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