贺晨艳, 龚军侠, 卢新兰, 马 维, 张天像

(陕西省结核病防治院 内科, 陕西 西安, 710061)

现阶段临床上肺结核的生物学指标包括炎性指标、趋化蛋白等，但这些指标无法很好地区分活动性肺结核及潜伏感染患者，影像学检测也缺乏典型的特征，因而需要寻求一种特异性及敏感性较高的生物学指标[1-2]。微小RNAs(miRNA)是机体代谢中的活性RNA分子，与机体的代谢、免疫、内分泌等系统密切相关，且与肿瘤、心血管事件的发生也有一定关联。本研究发现miR-146、miR-147在肺结核患者中呈高表达态，且与肺结核患者的病变程度存在相关性，现将结果报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2017年1月—2018年1月本院收治的51例肺结核患者为结核组，同期本院收治的49例其他肺部疾病患者为疾病对照组，以及同期本院进行健康体检的60例人群为健康对照组。结核组中男28例，女23例，年龄35～64岁，平均(51.08±1.56)岁; 疾病对照组中男26例，女23例，年龄33～63岁，平均(50.98±2.15)岁; 健康对照组中男33例，女27例，年龄36～59岁，平均(49.29±3.26)岁。3组性别、年龄等一般资料对比，差异无统计学意义(P>0.05), 具有可比性。

纳入标准: ① 符合结核病诊断标准[3]; ② 患者意识清晰，能够配合进行调研; ③ 小学及以上文化; ④ 患者及其家属对本次调研过程、方法、原理清楚明白，并签署知情同意书; ⑤ 经医院伦理会批准实施本次调研; ⑥ 影像学检查显示肺部存在渗出性病变或纤维空洞。排除标准: ① 合并精神障碍者; ② 合并其他器质性疾病，如冠心病、肾衰竭者; ③ 合并意识障碍者; ④ 合并自身免疫系统疾病者; ⑤ 近期接受激素类药物或免疫抑制剂治疗者。

1.2 方法

测定结核组、疾病对照组及健康对照组患者入组时miR-146、miR-147的表达程度，将结核组按照结核病变程度分为初治型肺结核及难治型肺结核，比较2组miR-146、miR-147的表达程度，对结核组患者实施治疗，对比不同治疗时期结核组患者miR-146、miR-147的表达程度。

1.3 观察指标

采集结核组、疾病对照组及健康对照组患者干预前空腹静脉血5 mL，使用离心机离心后取上层清液，使用miRNA提取试剂盒提取sRNA, 而后使用核算浓度检测仪检测其纯度与浓度，检测完毕后置于80 ℃下保存，待样本采集完毕后统一检测, miR-146、miR-147表达采用荧光定量PCR法进行检测，对3组患者miR-146、miR-147的表达程度进行比较。

使用结核菌特异性酶联免疫斑点试验及影像学检测结果将结核组患者分为初治型肺结核及难治型肺结核，初治型肺结核胸片无明显异常，难治型肺结核胸片可见明显结核病灶或肺纤维化，对比2组患者miR-146、miR-147的表达程度。

参照《中国结核病防治规划实施工作指南(2008年版)》对结核组患者实施治疗，药物选择为利福平、异烟肼、乙胺丁醇、吡嗪酰胺，服药均为1次/d，连续服用4个月，检测治疗前、治疗1个月及治疗2个月时结核组患者miR-146、miR-147表达程度。

1.4 统计学方法

2 结 果

2.1 干预前不同组别患者miR-146、miR-147的表达程度比较

治疗前3组miR-146、miR-147的表达程度为结核组高于疾病对照组，疾病对照组高于健康对照组，差异均有统计学意义(P<0.05), 见表1。

表1 3组患者干预前miR-146、miR-147表达程度对比

与健康对照组相比, *P<0.05; 与结核组相比, #P<0.05。

2.2 不同病变程度结核患者miR-146、miR-147表达程度比较

难治型肺结核患者miR-146、miR-147表达程度依次为(2.63±0.31)、(2.97±0.38), 高于初治型肺结核患者(1.68±0.51)、(1.79±0.29), 差异有统计学意义(P<0.05)。

2.3 不同治疗时期结核组患者miR-146、miR-147表达程度

随着治疗时间的推进，结核患者miR-146、miR-147表达程度呈逐渐下降趋势，以治疗前、治疗1个月及治疗2个月作为观察点，各观察点miR-146、miR-147表达程度比较，差异有统计学意义(P<0.05), 见表2。

表2 不同治疗时期结核组患者miR-146及miR-147表达程度(n=50)

与治疗前相比, *P<0.05; 与治疗1个月相比, #P<0.05。

2.4 ROC曲线分析

ROC曲线分析显示，不同时间点miR-146、miR-147对肺结核具有较好的诊断意义，敏感度和特异度均较高，见表3。

表3 不同时间点miR-146及miR-147的ROC分析

3 讨 论

结核病的主要临床症状包括低热、盗汗、乏力、消瘦等，严重者可出现咯血、呼吸困难，早期的鉴别与诊断对结核病的治疗具有重要的意义，能够显著改善患者预后，缩短其病程[4]。传统肺结核诊断技术主要为炎性因子检测、结核菌素试验、影像学检查等，但上述方法均缺乏特异性，敏感性也不高。

MicroRNA是一种转录后有22个氨基酸的小分子物质, 2001年Ambros[5]研究发现miRNA能够调控线虫幼虫发育时序，数年后其他学者的研究指出miRNA能够通过影响RNA与蛋白质的结合，从而对个体活动起到负调控作用。现阶段已有约1 500个人类miRNA被发现，其中30%以上的基因能够通过调控基因表达来参与个体的生长、免疫、发育等过程，而miRNA在肺结核发病机制中的作用已得到证实。李奕平等[6]研究指出, miR-146基因包括miR-146a及miR-146b两类亚型，在各类免疫调节细胞中呈高表达态，能够促进Treg细胞的增殖和分化，能够调节个体的免疫反应。祝源[7]研究也发现, miR-146高表达的大鼠肾脏损伤会大于低表达大鼠。Cardwell等[8]研究指出, miR-147在冠状动脉病变患者中呈高表达，柳家荣等[9]研究发现, miR-147能够靶向调控卵巢癌细胞的增殖与凋亡，这些都提示miR-146、miR-147在调节个体免疫系统、调控细胞增殖分化中具有重要作用。

本研究结果显示，与疾病对照组及健康对照组比较，结核组患者miR-146、miR-147呈高表达，且难治型肺结核患者个体miR-146、miR-147表达强度大于初治型肺结核患者，考虑原因为miR-146、miR-147能够通过调控转录后蛋白水平来调控靶基因功能，上述miRNA广泛参与细胞的分化、增殖、凋亡、血管生成中，与个体免疫系统存在密切联系。刘守江等[10]研究也指出, miR-146、miR-147能够通过抑制T细胞的增殖来调节机体的抗结核免疫反应，因而在结核患者中miR-146、miR-147呈现高表达。本研究还发现miR-146、miR-147在诊断肺结核中具有较高的特异性和敏感度，分析其原因为miR-146、miR-147与个体炎性反应关系密切，能够通过信号通路来进行负向反馈，调节结核病患者的免疫应答，不同病变时期的炎性反应强度不同，因而检测miR-146、miR-147表达也有显著差异。