艾伟伦，董凌月，安威

（首都医科大学细胞生物学系肝脏保护与再生北京重点实验室，北京 100069）

肝纤维化（liver fibrosis）是肝脏受损后，胶原等细胞外基质过度堆积的病理过程[1]。肝星形细胞（hepatic stellate cell，HSC）是肝脏内的非实质细胞，其活化是肝纤维化进程中细胞外基质最主要的来源。HSC活化并进而转分化为肌成纤维样细胞[2]的特征包括细胞的增殖、趋化、凋亡抑制和细胞外基质的分泌[3]。研究显示促进活化型HSC凋亡能够减少活化型HSC的数量，从而最终减轻肝脏纤维化[2]。因此认识其活化特征并探寻参与其中的关键分子是研究肝纤维化细胞学机制的关键。肝刺激因子（hepatic stimulator substance，HSS）是从肝部分切除术后初断乳的大鼠再生肝中提取的一种生物活性蛋白[4]，能够刺激肝脏再生，并保护肝脏免受毒物损伤[5]。HSS与细胞凋亡关系密切，例如，在非酒精性脂肪肝病（nonalcoholic steatohepatitis，NASH）模型中，肝细胞的凋亡伴随着HSS表达的降低，这提示HSS与肝细胞凋亡存在密切的关系[6]。此外，HSS能够减少肝细胞内质网应激引起的损伤，抑制肝细胞凋亡[7]。除肝细胞外，HSS还在HSC中表达[8]。然而，HSS与HSC的凋亡之间的相关性仍然不明。因此本实验建立HSS过表达HSC细胞模型后，利用过氧化氢（hydrogen peroxide，H2O2）构建活化型HSC的凋亡模型[9]，以此探究HSS对活化型HSC凋亡的影响。

材料和方法

1 实验细胞和主要试剂

人肝星形细胞LX-2细胞系，其表型为活化型HSC（本实验室保存）。DMEM（Dulbecco’s modifi ed Eagle medium）、Opti-MEM培养基和胎牛血清（fetal bovine serum，FBS）（美国Gibco公司）。胰蛋白酶和蛋白酶抑制剂（美国sigma公司）。细胞裂解液（北京索莱宝科技有限公司）。pcDNA3.0质粒（InvitrogenTM）（美国Thermo Fisher 公司）。pcDNA3.0-HSS质粒系本实验室前期构建[7]。……