张圣洁,景霞

(南京医科大学附属儿童医院药学部,江苏 南京 210008)

小儿腹泻病是一种以夏秋季发病为主、3周岁以下儿童居多的常见疾病。临床中主要以便质稀薄如水样、排便次数多为典型症状。病情发展迅速，如不及时治疗易耽误最佳治疗时机，可引起不同程度脱水、电解质及酸碱平衡的紊乱，进而引发儿童休克甚至危及生命。迁延不愈亦可造成营养流失、免疫力低下，影响儿童正常生长发育[1-2]。由于小儿的消化系统尚未发育成熟、机体防御抵抗疾病能力差，造成小儿腹泻的外来刺激复杂多样，主要常见因素有：饮食；病毒、细菌、寄生虫；滥用药物；过敏因素等。常规的大便检查往往无特殊发现，且抗菌消炎类西药无特殊针对性，滥用还易导致肠道菌群失调，加重病情[3]。中医认为，小儿脏腑易感外邪，脾运不佳，饮食不节，且泄泻主要病位在脾胃两脏，因而针对儿童的治疗方法应以调理脾胃为原则[4-5]。消化止泻方为南京市儿童医院专家多年经验方，由广木香、炒陈皮、炒苍术、薏苡仁、六神曲及焦山楂组成。苍术具醒脾助运，疏化水湿之功，与消积开窍的焦山楂，消食下气的六神曲配伍助运效果更佳，广木香、陈皮均有理气添湿之功效，薏苡仁最擅于健脾渗湿止泻[6-7]。诸味药相配健脾和胃、消食止泻，表里诸症自除。因汤药诸多不便，剂型改良后制成消化止泻口服液[8-9]，用于治疗食欲不振，症结积滞，恶心呕吐，大便溏薄，舌苔腻厚等症。临床应用多年，效果显著。为了更好地研究消化止泻口服液的产品质量[10]，本文采用了薄层色谱法，建立了制剂中炒陈皮、炒苍术、广木香、薏苡仁、焦山楂的定性鉴别方法，以有效控制制剂的质量。

1 仪器与试药

精密电子分析天平(德国Sartorius)；紫外线分析仪(上海勤科)；超声提取器(深圳云奕)；薄层色谱加热器(天津同普)；台式高速冷冻离心机(美国热电)；硅胶G板(批号 20130208、20140108，青岛海洋化工厂)；陈皮对照药材(批号 120969—201109)、苍术对照药材(批号 120932—200405)、木香对照药材(批号 120921—201309)、薏苡仁对照药材(批号 121254—201203)、山楂对照药材(批号 121626—201001)均购自中国药品生物制品检定所；消化止泻口服液为南京市儿童医院药学部自制(批号 121015、131216、140909)；阴性对照溶液自制；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1炒陈皮的薄层鉴别量取消化止泻口服液10 mL，加乙酸乙酯5 mL，充分振摇，待静置分层后，将萃取所得乙酸乙酯层分离并蒸干，残渣加甲醇2 mL，收集后即得供试品；量取未含有炒陈皮的样品10 mL，采用上述方法制备阴性对照；另取陈皮对照药材1 g，加甲醇10 mL，超声30 min，过滤，滤液备用，即得对照药材溶液。

点样管吸取上述三个批号供试品5 μL，阴性对照5 μL，对照药材2 μL，分别平行点于薄层板上，以石油醚(60～90 ℃)-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(6∶4∶0.5∶0.5)为展开剂，充分饱和展开缸之后放入薄层板，展距达8 cm后夹出晾干，置紫外光(365 nm)下[11]。可以看出位于中间的三条供试品色谱，在与最左侧的对照药材色谱平行位置上，有相同荧光斑点，最右侧阴性对照无同样斑点。见图1。

图1 消化止泻口服液炒陈皮薄层鉴别(1为陈皮对照药材；2为批号131216供试品；3为批号140909供试品；4为批号121015供试品；5为阴性对照溶液)

2.2炒苍术的薄层鉴别量取消化止泻口服液10 mL，加乙酸乙酯5 mL，振荡，静置分层后，过滤，分离出乙酸乙酯层，收集后即得供试品；量取未含有炒苍术的阴性样品10 mL，采用上述方法制备阴性对照；另取苍术对照药材0.8 g，加水煎煮1 h，滤过后将滤液按照供试品的处理方法同法制成对照药材溶液。

点样管吸取上述三个批号供试品5 μL、阴性对照5 μL、对照药材2 μL，分别平行点于薄层板上，以石油醚(30～60℃)-乙酸乙酯(10∶0.5)为展开剂，待充分饱和展开缸之后放入薄层板，展距达8 cm后夹出晾干，置紫外光灯(365 nm)下。从图2可以看出位于左边的三条供试品色谱，在与第4条对照药材色谱平行位置上，有相同荧光斑点，最右侧阴性对照无同样斑点。

2.3广木香的薄层鉴别量取消化止泻口服液60 mL，加石油醚(60～90 ℃)10 mL，密塞，振荡后，静置4 h后，过滤，分离出石油醚层，收集后即得供试品；量取未含有广木香的阴性样品60 mL，采用上述方法制备阴性对照；另取木香对照药材1 g，加入石油醚(60～90 ℃)10 mL，超声30 min，滤过，取滤液，即得对照药材品溶液。

点样管吸取上述三个批号供试品5 μL、阴性对照5 μL，对照药材2 μL，分别平行点于薄层板上，以环己烷-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1.2)[3]的上层溶液为展开剂，此处相对药典方法略微增大甲酸比例，从而使展开剂极性增大，较好地减轻了拖尾现象，待充分饱和展开缸之后放入薄层板，展距达8 cm后夹出晾干，喷1%香草醛硫酸显色，加热待斑点清晰，置日光下，从图3可以看出，最左侧的三条供试品色谱，在与第4条对照药材色谱平行位置上，有相同清晰蓝色斑点，最右侧阴性对照无同样斑点。

图2 消化止泻口服液炒苍术薄层鉴别(1为批号121015供试品；2为批号131216供试品；3为批号140909供试品；4为苍术对照药材；5为阴性对照溶液)

图3 消化止泻口服液广木香薄层鉴别(1为批号121015供试品；2为批号131216供试品；3为批号140909供试品；4为木香对照药材；5为阴性对照溶液)

2.4薏苡仁的薄层鉴别量取消化止泻口服液10 mL，加乙酸乙酯5 mL萃取，振荡，静置分层后，过滤，分离出乙酸乙酯层，收集后即得供试品；量取未含有薏苡仁的阴性样品10 mL，采用上述方法制备阴性对照；称取薏苡仁对照药材1 g，加乙酸乙酯10 mL，超声30 min，过滤后的滤液即为对照药材溶液。

点样管吸取上述三个批号供试品5 μL、阴性对照5 μL对照药材2 μL，分别平行点于薄层板上，以石油醚(60～90 ℃)-乙酸乙酯-乙酸(10∶3∶0.1)为展开剂，待充分饱和展开缸之后放入薄层板，展距达8 cm后夹出晾干，置紫外光灯(365 nm)[12]下。从图4可以看出，左侧的三条供试品色谱，在与第4条对照药材色谱平行位置上，有相同荧光斑点，最右侧阴性对照无同样斑点。

图4 消化止泻口服液薏苡仁薄层鉴别(1为批号121015供试品；2为批号131216供试品；3为批号140909供试品；4为薏苡仁对照药材；5为阴性对照溶液)

2.5焦山楂的薄层鉴别量取消化止泻口服液50 mL，5 000 r·min-1离心10 min，取沉淀加5 mL甲醇超声10 min，14 000 r·min-1离心5 min，过滤，分离收集上清液即得供试品。量取未含有焦山楂的阴性样品50 mL，采用上述方法制备阴性对照；称取山楂对照药材1 g，加甲醇10 mL，超声30 min，过滤后的滤液即为对照药材溶液。

点样管吸取上述三个批号供试品5 μL、阴性对照5 μL、对照药材2 μL，分别平行点于薄层板上，以石油醚(30～60 ℃)-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(9∶2.5∶1∶0.5)为展开剂，待充分饱和展开缸之后放入薄层板，展距达8 cm后夹出晾干，喷10%硫酸乙醇显色，置紫外光灯(365 nm)下。从图5可以看出，中间三条供试品色谱，在与最左侧对照药材色谱相应的位置上，同样有一浅一亮两处荧光斑点在相邻位置，最右侧阴性对照无同样斑点。

3 讨论

目前中药制剂存在的安全性问题尤为突出，中药的配伍中有效成分相互作用，毒性等问题都是研究中所要面对的。过去的许多中医经验方都欠缺一套完整的质量标准体系，或者仅凭对质量标准概念粗浅的认识简单的做了初步的质量标准实验。中药制剂的质量标准亟待得到提升和完善，才能使患者用药的安全性得到基本的保障。为了提高我院传统经验方消化止泻口服液的质量标准，并且制订出规范的定性质量控制方法，本实验在前期实验的基础上对消化止泻口服液中主要成分炒陈皮、炒苍术、广木香、薏苡仁和焦山楂五味药材进行了薄层鉴别研究。

图5 消化止泻口服液焦山楂薄层鉴别(1为山楂对照药材；2为批号121015供试品；3为批号131216供试品；4为批号140909供试品；5为阴性对照溶液)

研究结果显示色谱图中各成分之间分离效果好，特征斑点清晰，与阴性对照组差异明显。药品处理方法简便，实验重复性好。由于制剂工艺中包含了煎煮、醇沉和水沉等方法，使得药材中的诸多挥发性成分以及大极性的组分都被去除，考虑到此因素，若要对消化止泻口服液中主要药材的成分进行薄层鉴别就需要选择合适的萃取试剂和展开剂。在薏苡仁、炒苍术和炒陈皮三种药材的薄层鉴别的预实验中[13-14]，比较了多种极性试剂对供试品不同的处理方法后，最终确定以乙酸乙酯萃取供试品为最佳方案。在此条件下可以同时对此三种药材中主要成分进行提取，降低了实验的繁琐程度，大大提高了效率。

在焦山楂的薄层鉴别中，由于药材本身的炮制工艺影响以及后期在合剂制备过程中水煎煮等过程的作用，使山楂中的部分不溶于水成分严重流失。药典中山楂的的鉴别方法以熊果酸为对照品，由于制备工艺的因素影响，制剂中脂溶性成分含量较少，未鉴定出该成分。国内外对山楂的薄层鉴别方法较少[15-16]，本实验前期参照文献[17]曾采用乙酸乙酯来萃取供试品来鉴别焦山楂，但却无法在本薄层鉴别研究中重现此方法，推测不同的山楂炮制品中成分存在较大差异。因此最终在焦山楂的鉴别中采用了离心，甲醇溶解沉淀的方法制备供试品。用沉淀法得到的样品，有两处清晰斑点相对应，方法简便，易于操作。可为复杂制剂工艺中山楂的鉴别提供参考。炮制品的制备工艺比较复杂，若在薄层鉴别中选择药典中规定的对照品相比较，则无法对应的可能性较大。同时，若要筛选出单一有效成分进行对照也有一定难度，因此选择对照药材则更为适合。此外，广木香的展开剂在药典中薄层鉴别方法的基础上稍作改动，将展开剂环己烷-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)更改为环己烷-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1.2)，甲酸比例略微增大，从而使展开剂极性增大，较好地减轻了拖尾现象，将特征性斑点能更好地与供试品及对照药材中其他干扰成分分开。综上，本实验结果为提高我院自制制剂消化止泻口服液质量标准提升提供了可靠的参考依据。