HPLC法鉴别复方太子参口服液的研究

2018-09-10廖金英黄秋华林鑫冰游奶寿吴小玲张成辉

粮食科技与经济 2018年9期

廖金英黄秋华林鑫冰游奶寿吴小玲张成辉

[摘要]本试验采用高效液相色谱法（HPLC法）对复方太子参口服液中的太子参环肽B图谱进行分析，并探讨了其他可能作为复方太子参口服液定性定量的特征性成分。此法采用Welchrom C18（4.6×250mm，5μm）柱，柱温为室温、检测波长为203mn、流动相为乙腈一水（30：70）、流速1.0mL/min、进样量20μL。结果表明复方太子参口服液中的太子参环肽B峰形、分离度均符合要求，此法可用于复方太子参口服液中太子参环肽B鉴别。复方太子参口服液中检测有其他太子参特征峰，也可用于复方太子参口服液鉴别。本研究将为高效液相色谱法鉴别复方太子参口服液提供宝贵的理论依据。

[关键词]复方太子参口服液;太子参环肽B;高效液相色谱法

太子参（Pseudostellaria heterophylla）别名童参、米参、孩儿参、双批七、四叶参，是石竹科孩儿参属植物[1]。素有“中国太子参之乡”美誉的福建柘荣，其种植的太子参是闻名全国的道地药材，享誉国内外[2]，已经成为柘荣县许多大规模企业的主要生产原料[3]。福建省闽东力捷迅药业有限公司生产的复方太子参口服液以太子参为主成分，此外还有茯苓、灵芝等成分，具有益气生津、健脾消食的功效。目前主要采用薄层色谱法对口服液中的太子参进行定性鉴别，方法较复杂，且影响因素较多，会产生阴性结果，鉴别结果较不稳定。

目前，太子参药材的质量评价还没有统一的评价标准[4]。环肽类化合物是太子参中含有的特色成分，目前已经从太子参中分离出了16种环肽类化合物[5]。已有研究表明，太子参环肽B是太子参的主要活性成分，目前关于太子参环肽B测定的报道中，普遍采用高效液相色谱法[6-9]。高效液相色谱法可以适应中药和中成药成分的多样性、复杂性以及分离难度大的特点，因此，高效液相色谱法在中药化学成分分析领域广泛应用，发展迅速[10]。为此，本试验采用高效液相色谱法对复方太子参口服液中的太子参环肽B进行鉴别，并对其他的特征成分进行了初步的分析，以期为复方太子参口服液的质量标准制定提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 主要仪器

高效液相色谱仪Acme 9000：韩国英麟机器有限公司;紫外检测器Acme 9000：韩国英麟机器有限公司;电子分析天平BSA224S：赛多利斯科学仪器（北京）有限公司;超纯水机ING-CHE2kuv：默克化工技术有限公司;津腾针式过滤器：孔径0.22μm。

1.1.2 试剂及药品

甲醇、乙腈均为色谱纯：美国Fisher公司;太子参环肽B标准品（HPLC≥98%，B21236-20mg）：上海源叶生物科技有限公司;太子参对照药材（规格1g/瓶）：中国食品药品建东研究院;复方太子参口服液（规格10mL/瓶）：福建省闽东力捷迅药业有限公司。

1.2 方法

1.2.1 太子参环肽B对照溶液的配制

精密称取太子参环肽B标准品（98%）3.3mg，置于10mL容量瓶中，用甲醇溶解定容，充分混勻，制成323.4μg/mL的对照品储备液。用移液管准确移取1mL太子参环肽B对照品储备液，置于10mL容量瓶中用甲醇定容，充分混匀，制成32.34μg/mL太子参环肽B对照品溶液。同法，再稀释2倍和5倍，分别得到16.17μg/mL和6.468μg/mL太子参环肽B对照品溶液，配置好的对照品溶液用0.22μm的针式过滤器过滤，备用。

1.2.2 太子参对照药材溶液的制备

精密称取太子参对照药材1g，加入4mL甲醇，超声提取45min，用针式过滤器过滤，存于样品瓶中备用。另取部分续滤液用甲醇稀释1倍，制成太子参对照药材稀释液，备用。

1.2.3 供试品溶液的配制

随机抽取10支复方太子参口服液，将内容物倒出，混合均匀，从中随机取样，用0.22μm微孔滤膜过滤，将续滤液置样品瓶中，制成未稀释的混合供试品溶液。另取5mL未稀释的混合供试品溶液，置于10mL容量瓶中用甲醇定容后摇匀，制成稀释2倍的供试品溶液，过滤，置样品瓶中备用。同法制成稀释4倍的供试品溶液。最终得到3个浓度梯度的10瓶混合的供试品溶液。

1.2.4 色谱条件

色谱柱：WelchromC18（4.6×250mm，5μm）柱;柱温：室温;检测器：Acme 9000紫外检测器;检测波长：203nm;流动相：乙腈-水（30：70）;进样量：20μL。

1.2.5 复方太子参口服液中太子参特征峰检测

取太子参环肽B对照溶液、太子参对照药材溶液和3个浓度梯度的供试品溶液，按1.2.4下的色谱条件进样，采集时间为40min。对比太子参环肽B、太子参对照药材和供试品三者高效液相色谱图的共有峰，并记录其中峰面积随供试品溶液浓度变化而变化的色谱峰。并计算太子参环肽B峰与邻近色谱峰的分离度R，R越大，说明太子参环肽B峰与邻近色谱峰的分离越好，均要求满足R>1.5。

2 结果与分析

2.1 复方太子参口服液中太子参环肽B的鉴别

太子参环肽B对照品溶液的液相检测图谱如图1所示。由图1中可以看出，随着太子参环肽B对照品溶液浓度的增大，保留时间为18.9min左右的色谱峰面积也随之增大，其他色谱峰无明显变化，说明此峰即为太子参环肽B的特征峰。

复方太子参口服液供试溶液和太子参对照药材溶液的高效液相色谱图见图2。据图2可知，供试品和太子参对照药材中均含有一个保留时间为18.9min左右的色谱峰，可判定供试品溶液及对照药材溶液中均含有太子参环肽B。另结果显示供试品中太子参环肽B与前后邻近峰的分离度分别为3.4、17.4，太子参对照药材溶液中太子参环肽B与邻近峰的分离度为18.6，太子参环肽B对照品溶液中太子参环肽B与邻近峰的分离度分别为33.7，分离度均大于1.5，说明太子参环肽B与各溶液的其他组分离良好，且从图中可以看出峰形较好。由此可知，太子参环肽B可作为太子参的特征成分用于复方太子参口服液的鉴别。

2.2 复方太子参口服液中特征峰分析

复方太子参口服液中其他特征峰成分测定的结果如图3所示，供试品溶液与太子参对照药材中保留时间相同且峰面积随供试品溶液浓度变小而相应变小的色谱峰的保留时间分别为4.37min、7.37min左右，这两个特征峰对应的成分可能是供试品溶液中含有且含量较大的太子参特征成分，也可作为复方太子参口服液定性鉴别。

3 结论

本试验采用太子参环肽B的最大吸收波长203nm作为检测波长，此波长与甲醇的末端吸收接近，甲醇是本试验的溶剂，采用此波长会出现较大的溶剂峰，但太子参环肽B峰与邻近峰的分离度良好，对太子参环肽B的测定无影响[11]。

复方太子参口服液的配方较复杂，干扰成分较多，本试验采取直接过滤的方法配制供试品溶液，故复方太子参口服液中太子参环肽B的检测结果含量较低，在配制供试品溶液时，可以用乙酸乙酯萃取，浓缩处理后再进行检测，但采用此法也会造成太子参环肽B的损失[12]。

本试验所需的太子参环肽B标准品是以太子参为原料，提取分离纯化而得到的[13]，价格昂贵，故采用此法成本较高。

本试验发现复方太子参口服液中除太子参环肽B以外，还检测到其他特征峰存在，但还不确定是何特征物质，可以对其成分做进一步研究。此外，福建柘荣产的太子参中太子参环肽A的含量是太子参环肽B含量的10-20倍[14-20]，也可对其进一步研究，为复方太子参口服液的质量标准提供更多的参考。

参考文献

[1]褚书豪，汪小彩，冯良，太子参化学成分及其药理作用研究进展[J].光明中医，2016（7）：1047-1048.

[2]黄冬寿，王树责.福建“柘荣太子参”栽培环境的道地性研究[J].中国野生植物资源，2010（2）：12-14.

[3]李东，林丽莉.柘荣太子参，主导国内市场数十年[J].福建人，2016 （11）：44-46.

[4]康传志，周涛，江维克，等，我国太子参栽培资源现状及药材品质的探讨[J].中国现代中药，2014 （7）：542-546.