任雨洁，佘 刚，侯梦晨，邓秀玲，赵丽梅

(西安交通大学医学部基础医学院生理学与病理生理系，陕西西安 710061)

心房结构重塑，尤其是心房纤维化，是房颤持续发生的重要因素。心房纤维化通过持续性阻断心房肌纤维束而导致局部传导紊乱，进而引发房颤。因此，控制心房纤维化可用来预防房颤复发[1]。房颤发生机制的研究涉及到心房成纤维细胞(atrial fibroblasts, AFs)，因此体外培养的AFs是研究心房纤维化机制的关键。但在当前细胞分离技术中，AFs原代培养尚无成熟有效的方法，目前的研究多采用新生乳鼠整个心脏分离培养的成纤维细胞，缺乏心房特异性，且无法真实的反映成年AFs的特性。本研究首次尝试使用成年大鼠心房组织，用混合酶消化法分离培养原代AFs，探索可行的成年大鼠AFs的体外培养方法，以期为相关研究提供更加可靠的体外细胞模型。

1 材料与方法

1.1实验动物清洁级健康雄性Sprague-Dawely(SD)大鼠，6周龄(约200 g)，由西安交通大学实验动物中心提供。本研究方案通过西安交通大学医学部伦理委员会的审查并获得批准。

1.2主要试剂及器材胶原酶(Ⅱ型，Gibco)、胰蛋白酶(Sigma)、DMEM(Gibco)、新生胎牛血清(fetal bovine serum, FBS, Gibco)，兔抗波形蛋白(Vimentin)多克隆抗体、兔抗胶原受体2蛋白(DDR2)多克隆抗体、兔抗vWF、兔抗α-SMA均购自北京博奥森生物技术有限公司，Cy3(3H-吲哚菁类染料)标记的山羊抗兔IgG(西安壮志生物科技有限公司)；二氧化碳恒温培养箱(日本Sanyo公司)、医用净化工作台(北京半导管仪器厂)、低速离心机(安徽中科中佳科学仪器有限公司)、倒置相差显微镜(麦克奥迪实业集团有限公司)、全自动倒置显微镜(日本Nikon公司)。……